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        【求助】请教一个RNAi的问题,在线等!

        丁香园论坛

        1248
        请教各位老师:
        假设我想研究一类因子(配体)是如何作用于细胞膜上的两个受体并诱导细胞发生功能变化的,请问的是,构建完两个受体的RNAI载体,通过分组后转染,分别进行单一受体基因的抑制和两种基因的抑制,那么是否会获得好的效果,干扰只是影响新蛋白的合成,原来形成的在膜上的蛋白不是还存在,会存在多久?这样是不是不可行啊,长效表达载体构建后离体在在体试验分别要处理多长时间后才能进行效果检测啊!
        时间长短取决于蛋白的turnover的时间,一般用siRNA转染后,72个小时足够。RNAi载体瞬时转染后,应该在48-72小时后,但是RNAi的沉默效果还取决于瞬时转染的效率,这类的文章数以万计。构建稳定细胞系后,随时可用。
        谢谢:yellow stone;可否同时选用两种干扰载体进行转染,我没查到相关文献,不行的话原因是什么,还有就是可否即用干扰载体,又用一些阴断剂,这种联合使用可行否?谢谢

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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