帮隔壁老王养细胞第一篇

最近隔壁老王的青年基金终于申请下来，可是老王是搞化学工程出身的，对生物这块压根就不懂（ta shi nao can），这不，今儿就来找我了。

老王:大师兄细胞咋养?

大师兄：你猜，或者你去丁香通找找

老王：我找了，内容太多，要不你给我讲讲

大师兄：那好吧，那我就先从无菌操作开始

首先，实验进行前，无菌室及无菌操作台，要用紫外灯照射 30-60 分钟灭菌，然后开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，用75% 酒精擦拭无菌操作台面，并才能开始实验操作。

每次操作只处理一株细胞株，即使培养基相同，不同的细胞株也不能共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。

实验完毕后，将实验物品带出工作台，以75% ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。

2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70% ethanol擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。

3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。

4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台（至少Class II）。操作过程中，应避免引起aerosol之产生，小心毒性药品，例如DMSO及TPA等，并避免尖锐针头之伤害等。

5. 定期检测下列项目：

5.1. CO2钢瓶之CO2压力。

5.2. CO2培养箱之CO2浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。

5.3. 无菌操作台内之airflow压力，定期更换紫外线灯管及HEPA过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000小时/HEPA)。

6. 水槽可添加消毒剂（Zephrin 1:750），定期更换水槽的水。