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        pfu及噬菌体滴度测定

        互联网

        17635

        pfu指的是噬菌体的空斑形成单位。以下是关于测定M13效价的一个方法:

        测定噬菌体滴度

        只有当噬菌体的感染复度MOI (multiplicity of infection)值远低于1时(即细胞过量时),噬菌斑的数量才会随着加入噬菌体的量而呈线性增加。正因如此,建议检测噬菌体贮液的滴度时,在感染前进行稀释,而不是在高MOI值的情况下稀释被感染的细胞。低MOI值有助于确保每个噬菌斑仅含一个DNA序列。

        1. 接种ER2738单菌落于5-10 ml LB培养基中,摇床培养至对数中期(OD600 ~0.5)。

        2. 细胞生长时,微波炉融化上层琼脂,分成3 ml等份于灭菌试管中,每个噬菌体稀释度一管。保存于45℃备用。

        3. 37℃预温LB/IPTG/Xgal平板,每个噬菌体稀释度取一个平板备用。

        4. 在LB中准备10倍系列稀释的噬菌体。建议稀释范围:扩增的噬菌体培养物上清:108-1011;未扩增的淘选洗脱物:101-104。每个稀释度换一新鲜吸头,建议使用带滤芯吸头以避免交叉污染。

        5. 当菌体培养物达对数中期,分成200 μl等份于微量离心管中,每个噬菌体稀释度一管。

        6. 每管加入10 μl不同稀释度的噬菌体,快速震荡混匀,室温温育1-5 min。

        7. 将感染细胞加入45℃预温的上层琼脂培养管中,每次一管,快速混匀,立即倾注于37℃预温的LB/IPTG/Xgal平板上。适当倾斜平板将上层琼脂均匀铺开。

        8. 待平板冷却5 min后,倒置于37℃培养过夜。

        9. 检查平板,计数有~102个噬菌斑的平板上的斑数。然后用此数目乘以稀释因子即得到每10 μl噬菌体的空斑形成单位(pfu)滴度。

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