SDS法提取植物基因组DNA操作程序
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【实验目的】
学习和掌握常用基因组DNA提取方法。
【实验要求】
1.设计所采用实验方案并独立完成所有实验操作；
2.获得高纯度、完整DNA样品。
一、原理：
利用含高浓度SDS的抽提缓冲液在较高温度（55—65℃）条件下裂解植物细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后提高盐浓度（KAc）和降低温度（冰上保温）的办法沉淀除去蛋白质和多糖（在低温条件下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
二、药品试剂及耗材：
---- 20% SDS ph7.2
---- 5 mol/L KAc
---- 氯仿：异戊醇（24：1）
—— 异丙醇
—— 70%乙醇
—— TE缓冲液 :10 mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,PH8.0
耗材：
移液枪，15、2.0、1.5ml离心管，篮、黄、白枪头各四套离心管架4个，离心管盒2个，水浴泡沫8个，研钵及小药勺8套
棉手套，薄膜手套，透明胶布，剪刀
三、操作程序
1. 将1 g植物材料于液氮速冻，然后在研钵中将其磨碎，将粉末转至2 ml离心管中。
2. 加入1.2 ml预热至65℃的提取缓冲液(3V)，轻缓振荡混匀，加入120μl 20%SDS(达到终浓度2%)，混匀，置65℃水浴中放置30分钟，不时颠倒混匀。
3. 加入0.45 ml 5M的醋酸钾（1/10V），混匀，冰浴20分钟，在10000 rpm离心20 min。需要的话，Miracloth纱布过滤除去沉淀，取上清液转入另一离心管中。
4. 加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），轻轻颠倒混匀， 12000 rpm离心15 min。
5. 转移上清液到另一新离心管中，加入0.7V冰预冷异丙醇，轻轻颠倒混匀，（见丝状沉淀）-20℃放置30分钟沉淀核酸。
6. 25℃，12000 rpm，离心10 min，收集沉淀。
7. 弃上清，70％乙醇洗两次。
