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        多能ES细胞的培养

        相关实验:小鼠多能 ES 细胞的增殖实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        1. 准备下列试剂和材料:

        60 mm MEF 滋养板(接种不能超过 7 天)

        带棉塞无菌巴斯德吸管

        无 Ca2+ 和 Mg2+ PBS

        ES 生长培养基

        胰酶溶液

        2. PBS 冲洗 ES 细胞,巴斯德吸管加胰酶溶液覆盖培养皿底(2 ml/p60)

        3. 37℃ 孵育 5 分钟左右,至细胞脱落。

        4. 巴斯德吸管轻轻吹吸胰酶处理细胞 4~6 次,分散 ES 细胞。分散的细胞,包括单细胞和小的细胞团,转移至装有 2 ml 预热(37℃)ES 生长培养基的 15 ml 离心管。

        5. 离心收集细胞。吸掉上清,留约两倍于细胞沉淀的体积。轻弹离心管悬浮细胞。加 10 ml ES 生长培养基,吹吸至悬液均匀。

        6. 计数细胞。由于 ES 细胞较 MEF 细胞小,呈圆形,二者很容易区分。

        7. ES 细胞接种 60 mm MEF 滋养板。吸掉 MEF 滋养细胞培养基,加入悬于 5 ml ES 生长培养基的 ES 细胞。

        8. 每天换一次液,加 5 ml ES 生长培养基。

        来源:丁香实验

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