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        神经元原代培养

        相关方法:消化法原代培养实验

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        从孕17-18天的雌鼠的胎儿分离神经元细胞。孕雌鼠麻醉然后解剖,胎儿收集到HBSS-1中然后快速断头。剥离脑膜和白质后,大脑皮质收集入HBSS-2 液中机械磨碎。皮质碎片移到有0.025%胰酶的HBSS-2液中37°C消化15分钟。

        胰酶消化后,细胞用含有10%胎牛血清的HBSS-2液冲洗两次,用神经基础培养液重悬细胞(培养液添加了0.5mM左旋-谷氨酰胺,25μM左旋-谷氨酸,2%B27和0.12mg/mL庆大霉素)。以1×105cell/cm2接种到事先用多聚赖氨酸包被的培养皿上,放到37°C,5%CO2湿温培养箱里进行培养。

        每3天用吸管换液,一次换0.5mL。体外培养8天细胞就能用于实验。

        选用17-18天的胎鼠能够提高神经元培养的效率,因为与乳鼠相比胚胎组织的细胞连接还很少。

        因此,用乳鼠会使神经元的分离更加困难,会造成细胞连接不可逆的损伤,细胞之间的共同的轴突和树突更容易发生损伤。另外,用出生后1天内的大鼠皮质培养容易有胶质细胞污染,而用胎鼠则可以避免这种情况。如果用的是乳鼠,一般是在培养36个小时后加入阿糖胞苷,抑制胶质细胞生长。

        另外,如果把分化的影响看成是考虑的重要因素,可以用培养4天的、8天的、18天的细胞。其中一个例子可以是观察毒性物质对小孩和成年的不同效应。

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