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        LC-MS/MS方法检测动物组织中β-兴奋剂类药物

        互联网

        3354

        卫生部近日汇总公布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单》,上海月旭公司从公布的黑名单中统计发现,包括三聚氰胺、苏丹红、孔雀石绿、人工合成色素等都在内。针对这些令人触目惊心的食品添加剂,同时也为食品安全检查和监管工作提供有力的技术支持和保障,上海月旭公司迅速组织相关人员研制出了方便、快速、准确的检测方法,现将LC-MS/MS检测动物组织中β-兴奋剂类药物的方法公布如下:

        1. 适用范围

        适用于动物组织中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺药物的检测。

        2. 提取

        将5g动物组织、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸钠溶液置于50 mL离心管中,10000 rpm均质2 min。6000 rpm下离心2 min,将上清液转至另一离心管中。用15 mL乙酸乙酯重复提取一次,合并提取液。

        向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的盐酸溶液,涡动1 min,然后再6000 rpm下离心1 min,收集下层水相。重复萃取一次,合并下层水相,用2.5 mol/L NaOH溶液调节pH至5.2,待净化。

        3. 净化

        活化/平衡:依次向Welchrom® P-SCX(60mg/3mL)(上海月旭提供)中加入3 mL甲醇、3 mL水和3mL 30 mmol/L盐酸溶液,流出液弃去;

        上样:将上述提取液加入柱中,流出液弃去;

        淋洗:依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗,淋洗液弃去,并将小柱抽干;

        洗脱:用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脱,收集洗脱液,40℃下氮气吹,50%乙腈复溶,过0.22μm滤膜,待分析;

        4. 色谱质谱条件

        4.1 色谱条件

        色谱柱:Ultimate XB-C18 液相色谱柱(2.1mundefined 100 mm, 3 μm)(上海月旭提供)

        时间(min) 流动相A(%) 流动相B(%)
        0 95 5
        3 95 5
        5 45 55
        10 45 55
        10.1 95 5
        15.0 95 5

        流动相:
              A:0.1%甲酸水溶液
              B:乙腈
              梯度洗脱
              流速:0.2 mL/min
              进样量: 10 μL
              柱温:35 °C
              运行时间:12 min

        4.2 质谱条件

        扫描模式:MRM
              离子源:ESI+
              毛细管电离电压:3.20 Kv
              孔电压(cone):45 V
              电离源温度:100 ℃
              脱溶剂温度:300 ℃
              锥孔气流速:50 L/Hr
              脱溶剂气流速:450 L/Hr

        名称  母离子  子离子 孔电压(V)  碰撞电压(eV)  驻留时间(ms) 定量离子对 定性离子对
        盐酸克伦特罗 277.2  167.8  20   28  100  - +
         203.0 20 16 200  + -
        莱克多巴胺 302.17  106.8   18 28 100   - +
         164.1  18 14  200  +  - 
        盐酸克伦特罗-D9  288.2   209.2  22  146  100   +   
        莱克多巴胺-D3   305.2  167.1  18  14  100   +    

        5. 结果

        5.1 回收率和重现性实验

        将猪肌肉空白样品经过液液萃取初步处理后,分别添加一定量的标准溶液,添加浓度分别为0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次内同一浓度做3次平行实验,共3个批次(样品典型回收率色谱图见附图)。

         

        添加水平(μg/kg)
        分析物 0.1  0.5  1.0
        Recovery (%) RSD (%)  Recovery (%)  RSD (%)  Recovery (%)  RSD (%) 
        盐酸克伦特罗 93.8  5.82  89.7 5.92  96.1  3.62
        莱克多巴胺 95.3 7.43 103.5   3.42 97.4 4.55  

        5.2 色谱图
         

        左图  猪肌肉中添加0.1 mg/kg 盐酸克伦特罗EIC谱图        右图  猪肌肉中添加0.1 mg/kg 莱克多巴胺EIC谱图

        本方法中使用到得耗材:

        固相萃取小柱Welchrom®  P-SCX 60mg/3mL (P/N:WSP020306)(上海月旭提供)
              色谱柱:Ultimate XB-18,5undefined2.1mm,3μm(P/N:Ult3B18205)(上海月旭提供)
              13mm,孔径0.22μm尼龙针孔滤膜(P/N: WEL-SFNY213022)(上海月旭提供)
              12孔固相萃取装置(WEL-Vac-12)(上海月旭提供)

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