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        WB 同一批次蛋白跑出的条带为何不一致

        丁香园

        10346

        WB,又叫蛋白质免疫印迹,是很常见单很重要的一个分子生物学实验。然而,大家常常会遇到各种问题,特别是新手,有时候不知道如何下手,学霸君汇总了一下。欢迎大家来一起交流共同进步。

        问题

        chengxue727 :

        每次提蛋白后会将样品在短时间内重复 2-3 次 WB,但是每次跑出的条带趋势不一致,上样量和其他条件都没有变,内参基本是整齐稳定的,不知道为什么目的条带就是不一致?求解。

        回答

        dxymuchong:

        内参稳定说明上样量稳定(应该大致是一样的),所以不存在什么上样量不一样的问题;出现这样的结果,问题出在每一步都有一定的可能性,比如电泳,转膜,敷抗体,显色等等。但据我所知,WB 最关键的还是转膜和敷抗体步骤,可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。我的建议是你再认认真真,仔仔细细做几遍,很可能重复性就做出来了。只是个人观点。

        200210lee :

        楼主最好上图,看下条带情况。听口气楼主应该是老手了,基本操作的问题我们没必要去考虑。我认为问题的关键在于成像的过程。同一张膜,本人可以在成像的时候,做出完全不同的图片结果。显色液的滴加,量,以及曝光时间,条带颜色(要求灰色而不是黑色)。所以最好有图片说明问题。

        无名冷雨 :

        这个问题我以前在做 western blotting 的时候也遇见过,楼主说是内参一致,而目的条带每次都不一样,我想说原因可能是在显影液环节,简单来说就是你的膜没有淋干净,上面残留参差不齐的 T/TBS,T/TBS 能稀释显影液,目的条带本来表达量就少,某一个点残留的 T/TBS 稍微多一点就可能导致显影效果下降,所以建议在显影液反应前,尽量将膜上的洗膜液淋掉(当然也不能让膜干了,要是实验室富裕的话,也可以多添点显影液,效果一样),希望对你有帮助。

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