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培养基

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常用培养基配方(六)

51 三糖铁琼脂(换用方法)成分:蛋白胨 15g眎胨 5g牛肉膏 3g酵母膏 3g乳糖 10g蔗糖 10g葡萄糖 1g氯化钠 5g硫酸亚铁 0.2g硫代硫酸钠 0.3g琼脂 12g酚红 0.025g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH。加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0。2%酚红水溶液12。5mL,摇匀。分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层 ...

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常用培养基配方

41 GN增菌液成分:胰蛋白胨 20g葡萄糖 1g甘露醇 2g柠檬酸钠 5g去氧胆酸钠 0.5g磷酸氢二钾 4g磷酸二氢钾 1.5g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.0制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH。分装每瓶225mL,115℃高压灭菌15min。 42 肠道菌增菌肉汤成分:蛋白胨1 10g葡萄糖 5g牛胆盐 20g磷酸氢二钠 8g磷酸二氢钾 2g煌绿 0.015g蒸馏水 100 ...

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常用培养基配方(四)

31营养琼脂成分:蛋白胨 10g牛肉膏 3g 氯化钠 5g琼脂 15~20g蒸馏水 1000mL制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2~7.4。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化。分装烧瓶,121℃高压灭菌15min。注:此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面,则应为2%。 32营养肉汤 ...

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常用培养基配方(三)

21 过氧化物酶试验试剂:2%儿茶酚溶液。3%过氧化氢溶液。试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL。静置于室温(20℃)中30~60min,观察结果。结果:阳性反应,细菌变为黑褐色;阴性反应,细菌不变色。注:过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制。 22 磷酸盐缓冲液储存液磷酸二氢钾 34g1mol/L氢氧化钠溶液 175mL蒸馏水 82 ...

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常用培养基配方(二)

11苯丙氨酸培养基成分:酵母浸膏 3gDI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g) 2g磷酸氢二钠 1g氯化钠 5g琼脂 12g蒸馏水 1000mL制法:加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min,使成斜面.试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36±1℃培养4h或18~24h.滴加10%三氯化铁溶液2~3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。 12 ...

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常用培养基配方(一)

01 糖发酵管成分:牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化钠 3g磷酸氢二钠(Na2HPO4•12H2O) 2g0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7。4制法:1葡萄糖发酵管按上述成分配好后按0.5%加入葡萄糖分装于有一个倒置小管的小试管内121℃高压灭菌15min。2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后分装每瓶100mL121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10% ...

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细胞培养基的使用方法(微孔滤膜过滤除菌)

细胞培养基的种类繁多,细胞培养方式也较多,如何正确地使用培养基及最大程度地保持培养基的营养以维持细胞的生长,对每个细胞培养工作者都很重要。培养基的使用依据不同的培养基种类、培养方式、细胞种类的不同而存在差异。 1 细胞培养液的构成 细胞培养液指细胞生长的液体环境,一般指完全培养液,添加了血清、水解乳蛋白、各种添加剂等可以直接使用的培养液。 1.1 细胞培养基&血清模式 血清对于在传统培养基 ...

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基本培养基的配制及细胞培养的条件

一、 培养基的特性——细胞生存的环境与条件 1、 温度条件(37 +0.5) 2、 pH条件 (7.2-7.4) 3、 气体条件 4、 水的质量(三蒸) 5、 渗透压 6、 营养条件 7、 无菌条件℃ 二、 培养基的分类 1、 平衡 ...

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细胞培养基的应用选择

选择培养基没有一定的标准,有几点建议可供参考: (1 )建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅参考文献,或在购买细胞株时咨询。 (2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试,许多培养基可以适合多种细胞。 (3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI1640 。 (4) 用多种培养基培养目的细胞 ...

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培养基的历史

体外培养(in vitro culture)包括:组织培养(tissue culture)、细胞培养 (cell culture)、器官培养(organ culture)。顾名思义,就是将活体结构成分(如活体组织、活体细胞或者活体器官等)从体内或其寄生体内取出,放在类似于体内生存环境的体外环境中,让其生长发育的方法。广义组织培养与体外培养同义。 体外培养已经历了约一百年的发展历史,但发展初期进程比 ...

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建立细胞系或细胞株

各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株,都是一些形态比较均一、生长增殖比较稳定的和生物性状清楚的细胞群。因此凡符合上述情况的细胞群也可给以相应的名称,即文献中常称之为已鉴定的细胞(Certified Cells)。已鉴定的细胞可用于各种实验研究和生产生物制品。当前世界上已建的各种细胞系(株)已难胜数,我国也建有百种以上,并在不断增长中。 体外培养细胞的种类和命名 体外培养细胞的名称,随培 ...

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细胞培养基的定义

人工模拟细胞体内生长的营养环境,维持细胞生长的营养物质它是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。 包括: 1.天然培养基 指来自动物体液或利用组织分离提取的一些培养基,如动物血浆、胚胎浸出液、血清和人血清,水解乳蛋白等。 2.合成培养基 人工设计、配制的培养基,如MEM、199、DMEM、RPMI1640等。 ...

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细胞培养常见问题解答(FAQ)

1 冷冻管应如何解冻?取出冷冻管后, 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻, 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化, 并注意水面不可超过冷冻管盖沿, 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时, 必须注意安全, 预防冷冻管之爆裂。 2 细胞冷冻管解冻培养时, 是否应马上去除DMSO? 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外, 绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞 ...

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细胞培养基的基本要求、组成及作用

细胞培养基的基本要求 1.营养成分:氨基酸、单糖、维生素、无机离子与微量元素。 2.促生长因子及激素 3.渗透压 4.pH 5.无毒、无污染 细胞培养基组成及作用 1.氨基酸 组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异,但有几种氨基酸细胞自身不能合成,必须依靠培养液提供,这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而 ...

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细胞培养目的和用途

1.科学研究 (1)药物研究开发,如新药筛选,疫苗、基因工程药物、细胞工程、药物研究与开发、单克隆抗体制备等。 (2)基础研究,如药物作用机理、基因功能、疾病发生机理等研究。 2.生物制药 (1)疫苗生产:如病毒性疫苗(肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等),多肽疫苗(肿瘤疫苗)等。 (2)基因工程药物生产:如EPO等。 (3)抗体药物、基因治疗药物生产。 (4)细胞工程药物生产:生物细胞内的一些生物 ...

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细胞培养基发展趋势和品质

细胞培养基发展趋势 1.无血清培养基:是设计用来在无血清条件下促使特殊类型的细胞生长或进行专门应用的培养基。需要添加生长因子和/或细胞因子,含有个别蛋白或大量蛋白组分。其主要优点:增加确定性;性能更一致;容易进行纯化和下游加工;提高制品安全性和/或产量。 2.无蛋白培养基:培养基中没有添加蛋白,但仍然可能包含一些动物或植物来源的成分(如低分子量肽的各种水解物)。&nbs ...

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细胞培养基本概念和环境

一、细胞培养基本概念 细胞培养 是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境,在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下,使期生长繁殖,并维持其结构和功能的一种培养技术。 细胞培养 的培养物为单个细胞或细胞群。 在医学遗传学研究中应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤或纤维细胞和各种能在体外长期生长的细胞系。外周血淋巴 细胞培养 具有时间短、技术简便、可重复取材等优点,它在临床染色体分析中使用最广泛。体外 ...

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无血清技术及其培养基

经历了天然培养基、合成培养基后,无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本,简化分离纯化步骤,避免病毒污染造成的危害。 无血清培养基(serum free mediumSFM):是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。虽然基础培养基加少量血清所配制的完全培养基可以满足大部分细胞培养的要求,但 ...

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无蛋白培养基与限定化学成分培养基

一、无蛋白培养基(protein free midiumPFM):即不含有动物蛋白的培养基。无血清培养基仍含有较多的动物蛋白,如胰岛素,转铁蛋白、牛血清白蛋白等。从生物技术发展的趋势来看,不含动物蛋白的培养基又广泛的应用前景,许多利用基因工程技术重组的蛋白质最终要应用于人体,如果再生长过程中使用了含有动物蛋白质的培养基,纯化过程就比较复杂,最终要达到一定的质量标准也有一定的难度。无蛋白培养基就是为 ...

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合成细胞培养基

合成培养基是根据天然培养基的成分,用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基。它有一定的配方,是一种理想的培养基。目前合成培养基多达10多余种,有的培养基仍在不断进行改良。早期组织培养是利用天然培养基,目前合成培养基已经成为一种标准化的商品,从最初的基本培养基发展到无血清培养基、无蛋白培养基,并且还在不断发展。合成培养基的出现极大的促进了组织培养技术的普及发展。 一、基本组分 基本培 ...

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