常用培养基配方（三）

1 过氧化物酶试验

试剂:2%儿茶酚溶液。

3%过氧化氢溶液。

试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL。静置于室温(20℃)中30～60min，观察结果。

结果:阳性反应，细菌变为黑褐色;阴性反应，细菌不变色。

注:过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制。

2 磷酸盐缓冲液

储存液

磷酸二氢钾 34g

1mol/L氢氧化钠溶液 175mL

蒸馏水 825mL

pH7.2

制法:先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后，再用蒸馏水稀释至1000mL。

稀释液:取储存液1。25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装每瓶100mL或每管10mL，121℃高压灭菌15min。

3明胶磷酸盐缓冲液

成分:

明胶 2g

磷酸氢二钠 4g

蒸馏水 1000mL

pH6。2

制法:加热溶解，校正pH，121℃高压灭菌15min。

4 乳酸-苯酚溶液

成分:

苯酚 10g

乳酸(比重1.21) 10g

甘油 20g

蒸馏水 10mL

制法:将苯酚在水中加热溶解，然后加入乳酸及甘油。

用途:检验真菌形态时用。

5 肉浸液肉汤

成分:

绞碎牛肉 500g

氯化钠 5g

蛋白胨 10g

磷酸氢二钾 2g

蒸馏水 1000mL

制法:将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨，氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30min。

26肉浸液琼脂
成分:
肉浸液肉汤(PH7.4) 1000mL
琼脂 17～20g
制法:加热溶化琼脂，分装烧瓶或试管，121℃高压灭菌30min。根据需要，倾注平板或放成斜面。

27牛肉(或牛心)消化汤
成分:
绞碎牛肉(或牛心) 1000g
15%氢氧化钠溶液 27mL
胰蛋白酶 40mL
三氯甲烷 1mL
氯化钠 10g
蒸馏水 2000mL
制法:
1 称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到80℃，维持15min。
2 加氢氧化钠溶液，对pH试纸呈弱碱性，冷至40℃。
3 加胰蛋白酶，氯仿，在36±1℃放置4～5h，每小时摇动一二次。
4 4h后，吸取上层液5mL于试管中，加5%硫酸铜溶液0.1mL，4%氢氧化钠溶液5mL，混合之。若呈红色，则不须再消化，可由温箱取出。
5 加入15%乙酸溶液45mL，对pH试纸呈酸性。
6 煮沸15min，使胰蛋白酶破坏，冷后，放冰箱内一夜。
7 次日吸取上层清液，加氯化钠10g，并加水补足原量，煮沸。
8 校正pH7.4～7.6(加15%氢氧化钠溶液约10mL)，加热，用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。
注:①此培养基可作为琼脂培养基的基础，不需加蛋白胨。
②胰蛋白酶之配制:称取去脂绞碎的猪胰500g，加入乙醇500mL，蒸馏水1500mL，混合之，装人玻塞瓶内。每日摇匀三次。3d后，用绒布过滤挤出其汁，加盐酸至0.05%，放冰箱内保存备用。

28血消化汤
成分:
绞碎猪胃 100g
绞碎猪血块 100g
蒸馏水 1000mL
浓盐酸 10mL
制法:
1 洗涤猪胃，除去油脂，保留胃粘膜，用绞肉机绞碎。
2 用绞肉机将猪血块绞碎。
3 将蒸馏水加热至55℃，加入猪胃，猪血块和盐酸，置55℃水浴中24h，时常加以摇动。
4 从水浴内取出，加入1moL/L碳酸钠溶液5mL，煮沸10min，置于冰箱内一夜。
5 吸取上层清液，加磷酸氢二钾1g，加热至75℃，加入1mol/L碳酸钠溶液45mL，煮沸，校正pH7.2～7.4。
6 用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。

29豆粉琼脂
成分:
牛心消化汤(PH7.4～7.6) 1000mL
琼脂 20g
黄豆粉浸液 50mL
制法:将琼脂加在牛心消化汤内，加热溶解，过滤。加入豌豆粉浸液，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。
豌豆粉浸液制法:取豌豆粉5g，氯化钠10g，加入蒸馏水100mL。置100℃水浴内加热1h，放于冰箱中过夜。吸取上清液即为豌豆浸液。

30血琼脂
成分:
pH7.4～7.6豆粉琼脂 100mL
脱纤维羊血(或兔血) 5～10mL
制法:加热溶化琼脂，冷至50℃，以灭菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板。亦可分装灭菌试管，置成斜面。亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。