DNA重组

方法一A液：1M，MnCl2： B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌； C液 称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅121℃高压灭菌备用。取1管B液（0.6ml），全部加入C液(46ml)中，混匀后，再用1ml移液器加入3.3ml A液， ...

第一节 概 述 在自然条件下很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内但在人工构建的质粒载体中一般缺乏此种转移所必需的mob基因因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞使之获得新的遗传性状的一种手段它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域 ...

Lentivirus Transduction of Hematopoietic CellsMing-Jie Li and John J. RossiDivision of Molecular Biology Beckman Research Institute of the City of Hope Duarte California 91010Excerpted from Gene Tran ...

Removal of Ethidium Bromide from DNA by Extraction with Organic SolventsJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas So ...

The Inoue Method for Preparation and Transformation of Competent E. coli: "Ultra Competent" CellsJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne AustraliaDavid W. Russ ...

1、提取DNA的简易方法:1)、从全血中提取DNA：取20μl抗凝血于0.5ml无菌管中，加500μl左右的ddH2O混匀后，12000rpm离心2分钟，弃上清，（若沉淀中仍 有红细胞需重复此操作1-2次）加入样品提取液20μl混匀100℃煮10分钟(可在扩增仪上进行)后12000rpm离心5分钟取上清2μl进行扩增。2)、从其它有核细胞中提取DNA：可直接加适量的样品提取液到装有发根、头屑、骨髓 ...

方法一：1. 标本预处理：将1ml EDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中，加入1ml磷酸缓冲盐溶液（PBS），混匀，3500g离心15min倾去含裂解红细胞上清。重复一次。用0.7ml DNA提取液混悬白细胞沉淀，37℃水浴温育1h。2. 消化：上述DNA提取液混悬白细胞，37℃水浴温育1h后，加入1mg/ml蛋白酶K 0.2ml至终浓度为100-200ug/ml上下转动混匀，液体变 ...

（一）外源ＤＮＡ和质粒载体的连接反应　　外源ＤＮＡ片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链ＤＮＡ５'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成４个新的磷酸二酯链。但如果质粒ＤＮＡ已去磷酸化，则吸能形成２个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有２个单链切口，当杂本导入感受态细胞后可被修复。相邻的５'磷酸和３'羟基间磷酸二酯键的形成可在体外由两种不同 ...

耐热DNA聚合酶特点：合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素，如何选择最合适的耐热聚合酶，是进行PCR实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热DNA聚合酶，虽然名称各不相同，但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。TIANGEN公司生产的耐热DNA聚合酶全部采用标准化生产工艺和质量检测标准，是经过多次分子筛、离子交换层析柱纯化的超纯型产品，去除了宿 ...

大片段DNA的测序: 通过鸟枪法 (Shot Gun Sequencing) 测序 鸟枪法测序的操作方法1. 用限制酶切下目的片段的大片段Insert DNA 并用Agarose凝胶电泳进行回收。2. 对回收的大片段DNA用物理方法 (如超声波等) 进行切断处理，然后用T4 DNA Polymerase对小片段 DNA进行末端平滑化。3. 进行Agarose电泳，切胶回收1 kbp ~ 2 kbp ...

有时候提DNA不是很顺，所以提出来大家讨论一下，因为我是做微生物的，我首先提供一下关于微生物的DNA 提取方法，大家觉的有可以改进的地方，欢迎讨论！！细菌DNA的提取：（一）试剂：1. 抽提缓冲液2% CTAB (W/V)2% PVP K25 (w/v) （去色素）100mM Tris-HCl (pH8.0)25mM EDTA (pH8.0)2.0M NaCl2.10M LiCl3. 2M LiC ...

1. 分离外周血白细胞(1)取患者肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10 min。(2)小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中。(3)在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15 min。(4)2500rpm离心10 min，弃上清。 (5)加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15 min。(6)3000rpm离心10 min，弃上清。(7)倒置离心管，去掉残液。(8)得白细胞， ...

近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为，人类基因组并非人们想像的那样稳定，诸如基因重排、扩增、缺失，突瘘和DNA甲基化类型改变等时有发生，这些改变对于基因表过和调控，以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。　　医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。在石蜡切片上进行原 ...

近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为，人类基因组并非人们想像的那样稳定，诸如基因重排、扩增、缺失，突瘘和DNA甲基化类型改变等时有发生，这些改变对于基因表过和调控，以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。　　医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。在石蜡切片上进行原 ...

1 DNA提取⑴ 新鲜外周静脉血3~5ml，以ACD（柠檬酸纳缓冲液）1/7体积抗凝；⑵ 3500rpm 15分钟离心，吸除上层血浆；⑶ 加5倍体积蒸馏水（灭菌），摇匀，静置5~10分钟，3500rpm15分钟离心，去上清，（若沉淀不够，可重复1~2次）；⑷ 吸取沉淀（少许液体）放入1.5ml离心管，STE 清洗2次；12000rpm 7~8分钟离心；⑸ 去上清后加0.5mlSTE，10%SDS ...

1 DNA提取⑴ 新鲜外周静脉血3~5ml，以ACD（柠檬酸纳缓冲液）1/7体积抗凝；⑵ 3500rpm 15分钟离心，吸除上层血浆；⑶ 加5倍体积蒸馏水（灭菌），摇匀，静置5~10分钟，3500rpm15分钟离心，去上清，（若沉淀不够，可重复1~2次）；⑷ 吸取沉淀（少许液体）放入1.5ml离心管，STE 清洗2次；12000rpm 7~8分钟离心；⑸ 去上清后加0.5mlSTE，10%SDS ...

载体主要有病毒和非病毒两大类其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ Kan+多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加poly（ ...

载体主要有病毒和非病毒两大类其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ Kan+多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加poly（ ...

一、 单选题

二、多选题