抗凝血DNA的提取方法

1. 分离外周血白细胞
(1)取患者肘静脉血5ml，EDTA抗凝，2500rpm离心10 min。
(2)小心吸取上层血浆，分装到3个0.5ml离心管中。
(3)在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀，冰浴15 min。
(4)2500rpm离心10 min，弃上清。
(5)加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15 min。
(6)3000rpm离心10 min，弃上清。
(7)倒置离心管，去掉残液。
(8)得白细胞，－80ºC冻存。
2. 从白细胞中提取基因组DNA  
(1)取白细胞，加4.5ml SE，使劲吹打，混匀。
(2)沿管壁加入0.5ml的10％SDS。
(3)加蛋白酶E 50μl／管。
(4)首尾轻摇10 min，混匀。
(5)37ºC水浴过夜。
(6)第二天取出，沿管壁加3 ml饱和NaCL，迅速手摇15秒，使蛋白变性析出。
(7)4000rpm离心10 min。
(8)取出上清，放于另一管中，加入等体积的三氯甲烷，混匀15 min。
(9)2500rpm离心10 min。
(10)取出上清，加入等体积的三氯甲烷，混匀10 min。
(11)2500rpm离心10 min。
(12)取上清，转入50ml管中，加3倍体积无水乙醇。
(13)首尾轻摇，见DNA絮状沉淀析出。
(14)将DNA挑至管壁，75％乙醇洗涤2遍。
(15)将DNA挑至0.5ml管中，冻干。
(16)加TE 300μl，使DNA溶解，4ºC保存。