DNA含量测定

相关专题 DNA连接与转化 X-gal溶液配制方法 X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。 IPTG溶液配制方法 IPTG为异 ...

相关专题 DNA连接与转化大肠杆菌的基因工程 冻融法质粒DNA转化至大肠杆菌操作步骤 1. 取100μl 感受态细胞于冰浴上融化。 2. 加入1μl 纯质粒，轻轻吹打混匀，冰浴30 min。 3. 将菌液放入42℃水浴中热激90 秒，立即放入冰浴中2 min。 4. 加入0.9ml LB液体(提前37℃预热)，于37℃恒温摇床上2 ...

相关专题 DNA连接与转化 什么是标记基因和报告基因?常用的标记基因和报告基因有哪些? 标记基因(marker gene)是一种能够起特异性标记作用的基因。通常用来检验重组DNA载体转化成功与否，或者检测目的基因在植物细胞或组织中的定位。常用的标记基因是一些抗生素抗性基因，如卡那霉素抗性基因、潮霉素标记基因等。 报告基因(reporter g ...

相关专题 DNA连接与转化 1 基本原理 转基因技术是当今生命科学研究领域最基本的技术。利用转基因技术改变物种的遗传性状从而获得新的品种或产品则是包括基因工程在内的生物技术产业的主要研发内容。 在下面的小实验中我们将通过基因转化的方法把一种对氨苄青霉素敏感的大肠杆菌转化成能抵抗氨苄青霉素的大肠杆菌。其基本原理是:细菌中存在一种环状DNA叫做质 ...

相关专题 DNA连接与转化 SOC培养基 成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌)。 TB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨12g 酵 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程基因工程让一切皆有可能 大肠杆菌作为外源基因表达的宿主，遗传背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，大规模发酵经济，倍受遗传工程专家的重视。目前大肠杆菌是应用最广泛，最成功的表达体系，常做高效表达的首选体系。 在这里必须指出的是，处于生物安全考虑，生物工程用的菌株是在不断筛选后被挑选出的菌株。这些菌株由于失去的细胞壁 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 在T2噬菌体侵染大肠杆菌的实验中为什么DNA会留在细菌的细胞里而蛋白质不会?并且噬菌体的DNA是怎样进入细胞的? 噬菌体侵染细菌的过程2009-04-10 12:49(感染阶段 ) 噬菌体侵染寄主细胞的第一步是“吸附”即噬菌体的尾部附着在细菌的细胞壁上然后进行“侵入。先通过溶菌酶的作用在细菌的细胞壁上打开一个缺口 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 O是指O抗原，也就是体细胞抗原，是包埋在细菌细胞壁中的脂多糖类;H是指H抗原，也就是鞭毛抗原，是蛋白质类，具有免疫性的结构。除此之外，还有K抗原，也就荚膜抗原，大部分是多糖;以及M抗原，类粘蛋白，多糖类。 大肠杆菌根据这四种不同抗原类型来进行血清学上的分类和分析。 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 大肠埃希氏菌(E.coli)通常称为大肠杆菌，是人类和大多数温血动物肠道中的正常茵群。但也有某些血清型的大肠杆菌可引起不同症状的腹泻，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类：致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(E.I"IEC)、肠黏附性大 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 ⑴、细胞的生长状态和密度 最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。不要用已 经过多次转接，及贮存在4℃的培养菌液。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳。即应用对数期或对数生长前期的细菌，可通过测定培养液的OD600控制。对TG1菌株，OD600为0.5时，细 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 操纵子学说： 1961年，法国科学家莫诺(J·L·Monod，1910-1976)与雅可布(F·Jacob)发表“蛋白质合成中的遗传调节机制”一文，提出操纵子学说，开创了基因调控的研究。四年后的1965年，莫诺与雅可布即荣获诺贝尔生理学与医学奖。 莫诺与雅可布最初发现的是大肠杆菌的乳糖操纵子。这是一个十分巧妙的自 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 1、获取目的基因。用限制性核酸内切酶切割下目的基因。 2、基因表达载体的构建。将目的基因与载体(大多数选用质粒)用DNA连接酶连接起来。 3、将目的基因导入受体细胞。将含目的基因的重组质粒导入农杆菌(农杆菌为受体细胞)。 4、目的基因的检测与鉴定。用DNA分子杂交技术/分子杂交技术/抗原-抗体杂交/个体生物学水平 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 大肠杆菌细胞表面没有结合DNA的特异性受体存在，金属离子诱导大肠杆菌摄取外源DNA具有一定的特异性。高浓度非生理条件下Ca2+诱导大肠杆菌摄取外源DNA，可能一方面是高浓度的Ca2+聚集在细胞表面改变了细胞壁的渗透性，使转化DNA更容易接近细胞膜。另一方面少量Ca2+进入细胞与胞内的PHB和Pi结合成复合物，在细 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 Xl1-Blue菌株 基因型：endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘ hsdR17(rK- mK+)。 特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。 用途：分子克隆和质粒提取。 DH5α菌株 基因型：F- endA1 glnV44 thi- ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 转化 A.将-70 0C下保存的感受态细胞(200μl)，室温下解冻后放置于冰上。 B.将ND-PUCm-T质粒DNA溶液(不超过50ng)或PCR产物与pUCm-T质粒的连结产物，体积不超过10μl，轻轻摇匀，冰上放置30min。 C.42 0C水浴中热击90s或370C水浴中热击5min，热击后迅 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 冰浴过程中，原来加在溶液中的钙离子和细菌细胞膜结合，在低温下形成液晶结构，这样，在42度热激下，这种液晶结构收缩，将细胞膜扯开孔道，使DNA进入细菌细胞中。这就是原理。 前面冰浴不清楚，热激我认为是让已经有孔的大肠杆菌孔膨胀，增加DNA进入的几率，然后立刻冰浴，使孔收缩，进去的DNA不要出来。个人想法，没看到过类 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 有几个地方需要检查： 1、菌液是否足够，如果是转化的菌，质粒浓度是否足够，感受态是否制备无误。 2. 涂布器是不是烧过之后直接接触了菌液。 3.平板的抗性是否有误 你可以用一个确定能够转化进细胞并且带有抗性的质粒去和你想转化的质粒做平行试验。 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 实验室的一般大肠杆菌拥有4288条基因，每条基因的长度约为950bp基因间的平均间隔为118bp(基因Ⅷ)。E.coli基因组中还包含有许多插入序列，如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段，这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的，由此表明了基因组具有它的可塑造性。 利用大肠杆菌基因组 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法。植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒载体上，受噬菌体T7强启动子控制;表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导。当需要表达蛋白时，在细菌培养基中加入IPTG来启动表达。不同载体在邻近克隆位点处具有编码不同的多肽“标签”的序列，在定位、检测或纯化 ...

相关专题 大肠杆菌的基因工程 实验步骤： 1、Inoculate from an overnight grown in LB.从培养过夜的LB平板上挑取单菌落 。 2、Grow in 250 ml "SOB" at 18℃ until OD600 = 0.6.(0.3)接种于250ml SOB，18度培养至OD=0.6。 3、On ice f ...