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        冻融法质粒DNA转化至大肠杆菌操作步骤

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        冻融法质粒DNA转化 至大肠杆菌操作步骤

        1. 取100μl 感受态细胞于冰浴上融化。

        2. 加入1μl 纯质粒 ,轻轻吹打混匀,冰浴30 min。

        3. 将菌液放入42℃水浴中热激90 秒,立即放入冰浴中2 min。

        4. 加入0.9ml LB液体(提前37℃预热),于37℃恒温摇床上200rpm×50min 温育。

        5. 将菌液5000rpm/min 离心5min,留200μl上清将菌体打散,均匀涂布于含适当

        抗生素的琼脂 平板表面(已提前涂布好抗生素,并预热),平板于37℃倒置培养过夜。

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