相关专题 腹水:腹水重组后可加入少量叠氮纳等来阻止细菌生长。腹水应当冻存。单抗最好能够小包装保存以避免反复冻融。若要保存较长时间,则不要在4℃。和血清不同,腹水中含有蛋白酶,会使抗体效价下降,因此加入蛋白酶抑制剂可以选择。 纯IgG:不要稀释抗体后来保存,除非加入羊血清,BSA等后。IgG会和玻璃,塑料等粘附。当IgG的浓度小于0.1 mg/ ...
相关专题 (一)材料与试剂1.抗原 牛结核PPD。2.血清 待检血清、标准结核阳性血清和结核阴性血清。3.硝酸纤维膜 孔径0.45µm。4.氯化金(优质)5.0.2Mol/L PB液6.0.05Mol/L Tris—HCl缓冲液7.硝酸银显影液(现用现配) 明胶(20g/L) 6.00ml 对苯 ...
相关专题 一、单克隆抗体的概念和原理 免疫反应是人类对疾病具有抵抗力的重要因素。当动物体受抗原刺激后可产生抗体。抗体的特异性取决于抗原分子的决定簇,各种抗原分子具有很多抗原决定簇,因此,免疫动物所产生的抗体实为多种抗体的混合物。用这种传统方法制备抗体效率低、产量有限,且动物抗体注入人体可产生严重的过敏反应。此外,要把这些不同的抗体分开也极困 ...
相关专题 血管内皮细胞不仅参与调节血管通透性和凝血过程,在免疫调节,移植排斥,肿瘤转移,炎症等许多过程中也具有重要作用。内皮细胞培养是体外研究内皮细胞功能的重要手段。70年代Eric等建立了内皮细胞分离及体外培养的方法。人脐带静脉是人血管内皮细胞最易获取的来源,在人内皮细胞的研究中被普遍采用。 ㈠ 原理在体外,内皮细胞在内皮细胞生长因 ...
相关专题 免疫斑点试验(Dot Immunobinding Assay DIBA)是利用硝酸纤维素膜(N、C或醋酸纤维素膜作为固相支持物,进行抗原抗体反应的免疫学检测方法。该法具有微量、快速、经济、方便等特点,可用于检测抗体或抗原。近年来已较多地应用于医学基础研究和疾病的诊断。 (一) 免疫斑点试验的基本原理 硝酸纤维素膜和醋酸纤 ...
相关专题 淋巴细胞增殖和分化是机体免疫应答过程的一个重要阶段。因此,检测淋巴细胞增殖水平是细胞免疫研究和临床免疫功能检测的一种常用方法。 (一) 原理 T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体,在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA)抗CD2、抗CD3 McAb作为多 ...
相关专题 (一) 原理 Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮的硅胶颗粒。渗透压很低( 粘度也很小,可形成高达1.3g/ml密度,采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。由于Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。此外,Percoll不穿透生物膜,对细胞无毒害,因此广泛用 ...
相关专题 溶血空斑形成试验是一种体外检测单个抗体形成细胞(浆细胞)的方法,故又称体外抗体形成细胞(Plaque Forming Cell PFC)测定技术。此项技术不仅可以作为免疫基本理论研究的有力工具,广泛地用于检测产生IgM类型(包括其它各类免疫球蛋白及其亚类)的抗体形成细胞,它还可作为临床筛选抗肿瘤新药以及研究中药对抗体免疫功能影响 ...
相关专题 干扰素(IFN)根据其产生细胞不同和理化性质、犐z物学特性的差异可分为α干扰素(IFN-α)、β干扰素(IFN-β)和γ-干扰素(IFN-γ)。它们在机体免疫调节、抗病毒感染中具有重要作用。检测IFN的方法主要分为定量测定(常用ELISA)和生物学活性的检测,后者较为常用。 (一)原理 干扰素能刺激某些指示细胞(如人羊膜 ...
相关专题 重组人α2a/α2b干扰素(rHuIFN-α2a、rHuIFN-α2b)生产流程中不可缺少的一环是产品的质量监控,通常采用的是HEp-2/VSV或Wish/VSV系统检测干扰素的生物活性。此系统常由于VSV或细胞的影响而不够稳定,且检测周期较长。我们用自制的2种针对rHuIFN-α2a和rHuIFN-α2b的单克隆抗体(McAb ...
相关专题 从1949年美国College of American Pathologists(简称CAP)首先开始研究临床实验室室内质量控制(简称质控)问题,美国学者Levery和Jenning于1950年发表第一篇关于使用质控图的实验室室内质控,临床检验实验室的室内质控工作正式拉序幕。 到70年代,实验室质量控制进入一个新的阶段--全 ...
相关专题 70年代后期在免疫酶技术中利用生物素-亲和素系统(Biotin-Avidin System BAS)标记抗体发展了又一种新型生物反应放大技术。由于BAS亲和力高所以具有高灵敏度、高特异性和稳定性等优点,在现代生物免疫学领域中已得到广泛应用,并显示出明显的优越性。已报道有用于放射免疫、免疫荧光和免疫电镜等技术中,但应用更多的还是在 ...
相关专题 测定细胞免疫功能首先要从人或动物外周血或组织中获取有活性的细胞,如淋巴细胞、巨噬细胞、粒细胞等。取得有活性的细胞应根据不同目的,采用不同方法,考虑(1)细胞纯度;(2)细胞获得量;(3)细胞活力;(4)使用方法的简易程度和本室条件等。目前常用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化外周血单个核细胞。 (一) 原理: 常用来分 ...
相关专题 1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交瘤细胞既可产生抗体,又可无性繁殖,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。 免疫细胞化学的 技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体,由于每种抗原都有几 ...
相关专题 临床检验常见的标本一般包括血液(指血,静脉血),尿,粪便,脑脊液,胸腹水,前列腺液,精液,阴道分泌物等,这些标本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。 一、血液标本 有些生理因素,如吸烟、进食、运动、情绪波动、妊娠、体位等均可影响血液中某些成分的变化,有些甚至还有昼夜变化。因此血液标本的采集应尽量避免生理因素干扰,以条件一致为 ...
相关专题 一、标本制作 可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片,经适当固定或不固定,作免疫荧光染色用。二、荧光抗体染色方法 (一)直接法 1.染色 切片经固定后,滴加经稀释至染色效价如1:8或1:16的荧光抗体(如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等),在室温或37℃染色30min,切片置入能保持潮湿的染色盒内,防 ...
相关专题 1) 直接法1.标本固定。2.PBS洗涤2×3分钟。3.1% H2O2(或1% H2O2 甲醇)抑制内源性过氧化物,室温10~20分钟。4.正常血清(1:10)孵育,室温20分钟。5.滴加酶标记的抗体37℃1小时或4℃过夜。6.PBS洗涤3×3分钟。7.DAB+H2O2显色5~10分钟,镜下控制染色结果。DAB+H2O2应用前15 ...
相关专题 一、非特异性染色的主要因素 组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点: (1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。 (2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。 (3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如Forssman氏抗原), ...
相关专题 1、PBS:取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中,混匀,测pH值应在7.2~7.4之间,若偏离此范围,请用0.1N的HCL或NaOH调整。2、TBS:2.1 Tris缓冲液配方:(0.5 M pH7.6)Tris(三羟甲基氨基甲烷)60.57g1N HCL约420ml双蒸水加至1000mlTris缓冲液配制方法: ...
相关专题 ELISA免疫实验技术 优质的试剂,良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA的操作因固相载体的形成不同而有所差异,国内医学检验一般均用板式点。本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点,珠式、管式及磁性球ELSIA,国外试剂均与特殊仪器配合应用,两者均有详细的使用说明,严格遵照规定操作,必能 ...