1. Introduction2. Materials3. Methods4. NotesPreparation of Probes and CompetitorsOptimization of Reaction ParametersControls for SpecificityElectrophoretic ConditionsExtended ApplicationsReferences从原 ...
凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离 ...
本文主要介绍了影响泳动度的各种主要因素。
电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时,该蛋白质带负电荷,在电场中向正极移动,蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷是零,在电场中不向任何一极移动。
分子生物学的从业者们都知道EB染料的有害性。百泰克公司2009年推出了新一代的凝胶透射仪,可用于核酸和蛋白质电泳凝胶样品的观察、处理、分析和拍照。可以避免EB的影响,又可以影响实验的效果。
凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。
凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。
聚丙烯酰胺凝胶电泳,普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大适用于分离同工酶及其亚型,大分子核酸等应用较广。琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA段。
PFEG(Plused-Field Gel Electrophoresis)技术是将细菌完全包裹在一种特殊的琼脂中,然后加入一些化学试剂,比如十二烷基肌氨酸钠,蛋白酶K等,将细菌中的蛋白成分全部溶化,消化,只剩下整个序列的DNA。经稀有限制性内切酶消化后,切割成大小不等的片断,然后将其置于脉冲场电泳槽中电泳,完成片段分离的过程。经染色脱色后,在读胶仪上显现酶切后的电泳图谱,并经统计软件的分析,即可判断出条带的不同,同时做出细菌的同源性分析,从而达到分型的目的。其中能影响电泳图谱的参数很多,如电泳的转换时间,电泳的总时间,电泳的角度,电压,电泳液的温度等等,且不同的参数会得到不同的电泳图谱。
PCR-SSCP实验步骤
PCR产物的电泳鉴定
DNA电泳 agarose胶
凝胶电泳是分子克隆的中心技术之一,DNA的凝胶电泳和RNA 电 泳
DNA酶解技术的应用 琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段原理及其操作
DNA的琼脂糖凝胶电泳
一、核酸及蛋白质常用数据 1.核苷三磷酸的物理常数 化合物 分子量 λmax(pH7.0) ...
【实验目的】 通过实验掌握琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA的原理与方法。 【实验原理】 琼脂糖是从海藻中提取出来的一种杂聚多糖,是由D型和L型半乳糖以α-1,3和β-1,4糖苷键相连形成的线状高聚物(如下图所示)。琼脂糖遇冷水膨胀,溶于热水成溶胶,冷却后成为孔径范围从50nm到大于200nm的凝胶。 琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段最为常用的方法之一,这种方法简便易行 ...
1、实验目的: 学习与掌握DNA电泳的技术方法,利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、含量以及分子量,及分离不同大小DNA片段。 2、实验原理: 电泳概念及种类~2• 电泳: 是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象 电泳基本原理 迁移率(或泳动度)是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度,可用下列公式计算: U =υ/E =(d/t)/(V/l) =dl/V ...
要跑琼脂糖凝胶电泳, 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗?能够照相的清楚的条带,至少需要多少量呢? 参考见解:5ng 已经可以了,但是或许20ng50ng-200ng效果好,在此范围内呈线性。 把210bp的pcr产物进行酶切得到190+20bp的两个片段请问能用琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果吗?用多大浓度的胶和多大的电压呢? 参考见解:可以用琼脂糖凝胶电泳分开电压不变可用1.5%到2%的胶20bp得 ...
影响电泳分离的主要因素: 1. 待分离生物大分子的性质:待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说,子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形,则其电泳迁移速度越快。 2. 缓冲液的性质:缓冲液的pH值会影响待分离生物大分子的解离程度,从而对其带电性质产生影响,溶液pH值距离其等电点愈远,其所带净电荷量就越大,电泳的速度也就越大,尤其对于蛋白质等两性分子,缓冲液pH还 ...