细胞功能测定

细胞培养中的污染分为两类，化学污染和生物污染。 化学污染 化学污染是一些对细胞有毒性的或对细胞产生刺激的化学物质。这些污染一般来自于没有洗净的器皿、不纯的化学试剂和质量较差的蒸馏水等。 化学污染中比较引人注意的是细菌内毒素。它是革兰氏阴性细菌细胞死亡后解体释放出的疏水性的细胞壁组成物质，对塑料等疏水性强的物质有很强的吸附能力。细菌内毒素可刺激部分细胞产生一些激素或细胞因子，对细胞生长和实验结果产生 ...

维持ES细胞处于未分化状态：ES细胞培养用含有ESGRO（白血病抑制因子）的高糖培养基来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1％明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2－3天从达到80％－90％融合的平板按1：8的比率传代细胞一次，细胞传代以后，在将细胞接种在0.1％明胶包被的培养皿之前，通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时，使分化细胞粘附，从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于 ...

试剂准备：LB培养基: 500mL双蒸水：600mL 高压灭菌 预冷10%甘油：1000mL 预冷250ml离心杯：高压灭菌 预冷50mL离心管数个，250mL摇瓶4个，1.5mL EP管 高压灭菌制备步骤：1、接种原代菌（DH5α或DH10B），次日挑取单菌落，放入1mL LB培养基中，37℃，300rpm，6 hr；3、然后转接到含500ml LB液体培养基的2L摇瓶中（按1:50 ...

试剂准备：LB培养基，50mL离心管4个，250mL摇瓶1个，1.5mL 离心管高压灭菌0.1M CaCl2高压灭菌含15%甘油的0.1M CaCl2：50%甘油、0.15M CaCl2高压灭菌，1:2混合配制制备步骤：1．前夜接种受体菌（DH5α或DH10B），挑取单菌落（或直接用－80℃保存的单克隆菌液100μL）， 放入10mL LB培养基中37℃摇床培养过夜（约12~16 ...

1.如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件： 细胞系 细胞类型 种 组织 推荐使用的培养基 293 成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM 10% 热灭活马血 ...

Gomori染色是用于检测细胞中骨型碱性磷酸酶(bone alkaline phosphatase BALP)的一种染色法，具体内容如下：一、主要试剂准备：PBS、丙酮（或甲醛、95乙醇）、3%β-甘油酸钠、2%巴比妥钠、2�Cl2、2%MgSO4、2%硝酸钴、1%硫化铵（纯的硫化铵也为液体，且由于其有强烈的刺激性味道，建议现配现用）二、实验步骤：1、将无菌玻片放在细胞的培养皿中，待细胞 ...

Wnt配体蛋白在体外含量丰富，但是纯化非常困难。该方法使用Wnt11r蛋白作为一个例子来说明如何使用293T细胞产生分泌Wnt11r和收集Wnt11r蛋白质，在体外作进一步的生化实验。材料与试剂1. 293T细胞2. 胎牛血清（Invitrogen公司，10438-026）3. DMEM（高糖 货号＃11965，Invitrogen公司）4. ...

问：我想知道在用血细胞计数板计数时，所指的稀释倍数到底是什么，如取九滴细胞液和一滴台盼兰混合，再滴到计数板上用公式计算时其稀释倍数是10对吗，血细胞计数板计数很多文献都说在盖波片边缘加入1－2滴染色的细胞悬液，使之完全充满计数板上与盖波片间的空间我不明白如何加入细胞悬液。答:1、将细胞吹成单细胞悬液之后，只要将滴管靠在计数板与盖波片之间的空隙上，轻轻用力，由于负压细胞悬液会轻松的进入盖玻片与计数板 ...

结合绿色荧光蛋白表达的细胞周期分析广泛的用于研究绿色荧光蛋白标记的细胞的细胞周期分布。这个方案是一种用绿色荧光蛋白标记的斑马鱼胚胎来分析细胞周期的方法。材料与试剂1. PBS（Invitrogen公司14040）2. 胎牛血清3. 乙醇4. PFA（USB）5. Hoechst 33342 溶液（请加目录编号）6. ...

用无血清培养基把细胞悬液稀释到200～2000个/毫升，在0.1毫升的细胞悬液中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。Trypan Blue 台盼蓝 购买链接：http://www.biobars.cn/shop/goods.php?id=1705 (责任编辑：大汉昆仑王) ...

血球计数板每一大方格长为1mm，宽为1mm，高为0.1mm，体积为0.1mm3，可容纳的溶液是0.1l，那么每ml溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的10000倍。实验步骤（一）准备计数板：用酒精清洁计数板和盖玻片，然后用吸水纸轻轻擦干（二）制备细胞悬液：用胰蛋白酶消化单层培养细胞或收集悬浮培养细胞，制成单个细胞悬液。要求细胞密度不低于104/ml，若细胞数很少，应将悬液离心 ...

一、原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。计算细胞数目可用血球计数盘或是Coulter counter 粒子计数器自动计数。 血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber 中细刻9 个1 mm正方形再细刻16 个小格，深度均为0.1 mm。当chamber 上方盖上盖玻片后，每个大正 ...

问：细胞计数过程，用或者不用台盼蓝染色计数有啥区别？？不用台盼蓝染色的情况下，计数细胞还是数那些亮细胞？视野下，活细胞怎样判定？同一个标本，再用台盼蓝染色计数即等倍稀释后，看到的亮细胞明显减少，两种计数方法结果不一致是为什么？答：1、用或者不用台盼蓝染色计数有啥区别？？准确些。台盼蓝可以穿透死细胞的细胞膜，将细胞核染色。活细胞不着色。2、不用台盼蓝染色的情况下，计数细胞还是数那些亮细胞？视野下，活 ...

问：不小心把盒子里面的冻存管撒进液氮了，好几十支怎么取出来呀，是大液氮罐，里面液氮还比较多，而且还冻了很多其他的细胞，怎样把撒进液氮里面的冻存管取出来呀，而且不损伤其他冻着的细胞。急啊，老板知道了会把我骂死，求求各位了，我为了做实验都愁的内分泌失调了，现在又出了这档子事，没法活了呀，说实话自杀的心都有了。求求各位帮帮我吧，谢谢大家了答：我也干过这种事，如果有备用液氮罐那样比较好办，把架子倒过去，在 ...

问：现在刚刚开始做干细胞，想自己计数白细胞，用的是Sigma的0.4%台盼蓝，1:1混合，从2分钟开始细胞死亡越来越多，例如2分时有10%死亡，到5分钟就死一半了，到底是几分钟计数最准确呢？&还有一个问题，看到有1:1使用，也有1:9的，用哪种浓度最好呢？答1：0.4%应该是1:1混合的，1:9的是4%浓度的，这个染色的时间不应该太长的，因为对于胎盘蓝这种大分子，不能渗透就如细胞膜，但是如果染色时 ...

当冻存管储存在液氮液相中而没有使用CryoFlex Tubing 时，如何正确的溶解复苏细胞？在整个操作过程中必须穿戴保护服，包括手套，脸罩等。冻存管从液氮液相取出后必须在液氮气相中储存24h，这样可以使得液氮从冻存管中慢慢的蒸发和逃逸，从而降低冻存管中的压力。等在液氮气相储存24h后，将冻存管放入水浴槽，同时用毛巾覆盖，等熔融复苏结束后转移冻存物。 (责任编辑：大汉昆仑王) ...

Emmanuel SURANITI1 Elodie SOLLIER2 Roberto CALEMCZUK1 Thierry LIVACHE1 Patrice MARCHE2 Marie-Bernadette VILLIERS2 Yoann ROUPIOZ1 1 CREABUMR 5819 (CEA-CNRS-UJF) DRFMC CEA Grenoble France. 2 INSERM U82 ...

原理 利用萤光染剂（bisbenzimide Hoechst 33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。 测试步骤用 ...

一、核心技术介绍 实时无标记动态细胞分析技术（RTCA，Real Time Cellular Analysis）是通过特殊工艺，将微电子细胞传感器芯片整合到细胞检测板的底部，用以构建实时、动态、定量跟踪细胞形态和增殖分化等改变的细胞阻抗检测传感系统。当贴壁生长在微电极表面的细胞引起贴壁电极界面阻抗的改变时，这种改变与细胞的实时功能状态改变呈相关性，通过实时动态的电极阻抗检测可以获得细胞生理功能相 ...

细胞划痕实验是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。 基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。 优点： 1，在一定程度 ...