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        细胞计数和台盼蓝染色

        互联网

        60527
        血球计数板每一大方格长为1mm ,宽为1mm ,高为0.1mm ,体积为0.1mm3 ,可容纳的溶液是0.1l ,那么每ml 溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的10000 倍。

        实验步骤

        (一)准备计数板:用酒精清洁计数板和盖玻片,然后用吸水纸轻轻擦干。


        (二)制备细胞悬液:用胰蛋白酶消化单层培养细胞或收集悬浮培养细胞,制成单个细胞悬液。要求细胞密度不低于104 /ml ,若细胞数很少,应将悬液离心(1000rpm ,2min ),重悬浮于少量培养液中。


        (三)加样:将盖玻片盖在计数板两槽中间。用吸管轻轻吹打细胞悬液,吸取少量细胞悬液,在计数板上盖玻片一侧加细胞悬液,加样量不要溢出盖玻片,也不要过少或带气泡。否则要将计数板和盖玻片擦干净重新加样。


        (四)计数:在显微镜下,用10 ×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数,细胞压中线时,只计左侧和上方者,不计右侧和下方者。


        (五)计算:将计算结果代入下式,得出细胞密度。

        细胞数/ 毫升原液= (4 大格细胞数之和/4 )×104 ×稀释倍数


        注意事项

        (一)消化单层细胞时,务求细胞分散良好,制成单个细胞悬液,否则会影响细胞计数结果。


        (二)取样计数前,应充分混匀细胞悬液。在连续取样计数时,特别应该注意这一点,否则前后计数结果会有很大误差。


        (三)镜下计数时,遇到2 个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如细胞团占10% 以上,说明消化不充分;或细胞数少于200 个/10mm2 或多于500 个/10mm2 时,说明稀释不当,需重制备细胞悬液、计数。


        培养细胞活力的检测


        台盼蓝排斥实验


        1.制备单个细胞悬液,适当稀释;


        2.向细胞悬液中加入0.4% 台盼蓝溶液,使台盼蓝终浓度为0.04% ;


        3 .在三分钟内用血球计数板分别计数活细胞和死细胞,死细胞被染成淡蓝色。

        注意事项:在三分钟内完成死细胞计数,否则部分活细胞也会被染色,影响实验的准确性。

        (责任编辑:大汉昆仑王)

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