细胞周期/增殖/凋亡检测

magichunter 我现在发现我的药物可以促进细胞死亡，但是不知道是通过什么途径作用的。因此进行了以下实验：（1）空白对照（2）药物给予组（3）药物+caspase抑制剂（4）药物+自噬抑制剂（3MA）结果如下：（存活率MTT）（1）100%（2）50%（3）80%（4）20%请问这个结果是不是说明：药物在诱导细胞死亡的过程中，自噬可以保护细胞损伤，而caspase依赖性的凋亡可以诱导细胞损伤。如果是的话，怎么进行下面的研究呢？da ...

gyr2009 最近做凋亡，这是拍的电镜照片，很怪异，细胞核内染色质浓缩，但细胞膜裂解，细胞质内一片混乱，细胞这是怎么了，是凋亡吗？canyang112 是凋亡，染色质边聚，很典型。细胞膜本来就应分离，不然以后怎么形成凋亡小体，细胞核内深染色的可能是染料杂质。另外，细胞质内好好像是自噬泡，许多致凋亡因素可同时引起自噬。xiongfeitcm 目前正在研究自噬，和我们实验室结果很像，像是自噬geduodou85 有点像自噬小泡 建议做染 ...

songdianwei 你好！最近用R&D公司的CAMP测定试剂盒测细胞内CAMP的浓度，但是细胞一直裂解不好！我是按照试剂盒的说明书上操作的，我反复冻融了四五次，裂解效果还是不理想！做出来的结果根本没有梯度！谢谢各位大侠了！急需帮忙！sunopal_5200 请问您做出来了吗？我也买了RD试剂盒，预实验都不理想，值太低。楼主做时加IBMX了吗？zwh2004 我08做过cAMP检测，当时是用的是PE公司的检测试剂盒，效果还不 ...

阳光不锈2000 大家好,本人要做有关射线及药物对肺癌细胞周期阻滞的课题,我查了一些文献,发现无论是射线还是药物,作用前大多细胞一般都处于G0/G1期,及S其,作用后,G0/G1期及G2/M比例升高,表现为阻滞,是否与DNA损伤及激活DNA修复酶有关而导致进入G2/M期.由于我是搞临床的,所以对基础这部分不是特别了解,想请教各位老师及朋友,能否给解释一下相关机制或原理,不胜感激.谢谢dnazyme 是否与DNA损伤及激活D ...

eeflying 目前有两种化合物，分别为Bcl-2和PARP的抑制剂，虽然这两个指标通常作为细胞凋亡的指标常用于分子生物实验，但是，如何证明这两个分子被抑制的实验却第一次碰到，请各位战友支招，我要直接检测哪个蛋白的WB 或者做什么实验合适？magichunter 用western检测bcl-2的含量变化，检测PARP活性裂解片段的含量变化以及原型态PARP的含量变化。eeflying 你和我犯的一样的错误，目前不是看PAR ...

zhilan1985 我用抗肿瘤药物处理后细胞发生了凋亡，但是RT-PCR结果显示原癌基因c-myc表达上调，文献上在其它细胞实验中显示有下调的，有不改变的。感觉结果有些奇怪，请问在抗肿瘤细胞生长的情况下，有可能会使c-myc表达上调吗？还望了解c-myc的高手帮忙解答下，谢谢!doctormy zhilan1985 wrote:我用抗肿瘤药物处理后细胞发生了凋亡，但是RT-PCR结果显示原癌基因c-myc表达上调，文献上在其 ...

旺仔小馒头天字号 小女正在动物身上造模，需要一个促凋亡的模型，请问大侠们哪些促凋亡药物效果好点呢，可否推荐些常用的促凋亡药物呢fsq6666 化疗药，如紫杉醇。ikewei 阿霉素 很容易引起经典的凋亡本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

磨磨816 我刚接触细胞凋亡，想问一个比较小白的问题“我的实验是做了一个浓度梯度发生装置，通过它可以在一个区域内形成稳定的浓度梯度。想在这个区域内，进行细胞凋亡的实验。细胞凋亡只是一个应用，创新点不在这里。打算用hela细胞，进行在线的凋亡和检测，有什么好的方法吗？只有一台生物倒置显微镜，别的课题组还有一台荧光，可以借用一下。用什么凋亡的药物比较好，用的药物最好是便宜易得的，基础方法即可。请高手们指教啊， 我是学化学的，只 ...

sixiuwen123 请问我享用流式测凋亡,可现在我的载体本身有绿色荧光,EGFP的表达,本来想用annexin的,现在我该用什么方法上流式测凋亡呢freecell 测定凋亡的方法太多了.不一定要用流式.http://gene.bjmu.edu.cn/news/apoptosis.htm4trggg tunel可以imhkq 买了博士德的试剂盒 死活都做不出来 咋办呀本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实 ...

yy59410 希望有这书的站友给上传一下，真的很需要非常感谢！wk125 是英文版的那本吗，我有，如果是的话可以发到你邮箱里nickysong 你是要Humana Press出的Methods in Molecular Biology那个系列里的Apoptosis吗？if it is，just pm mekfk19840101 我也很需要 如果哪位有请发到我的邮箱 KFK19840101@163.com感激不尽yy59410 英文版的我有了，谢谢。我想要本中文的哪 ...

liupeizc 请问哪位高手知道成纤维细胞的生长周期啊，更确切的是血管外膜成纤维细胞生长周期，谢谢！zhujoker 估计都没人做过，你如果需要观察其生物学功能，就自己做一次，也算原创了啊！freecell 这里有：http://www.currentprotocols.com/protocol/cb0201本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：sh ...

johnruowang 很多文章都是用serum-free的方法来加药处理肿瘤细胞，细胞在没有血清喂养的情况下经历24到48小时会不会造成流式法测细胞周期的结果不准确？有些文章用免血清法加药后再测细胞周期或者凋亡得到的结果会不会不是药物作用的结果，而是由于免血清培养造成的假象呢。zhujoker 个人认为那么无血清培养基是对肿瘤细胞的细胞周期会产生影响的，因为很多文献细胞周期的同化就是采用的此种方法，但是肿瘤细 ...

janusross 看到有用RNA/DNA这个比值来鉴定个体的生长差别，并通过这个指标比较生长的优劣，这个评价法有依据吗？看到有几篇水产的文献中用这个比值（肌肉组织的RNA/DNA）来比较不同个体的生长性能，有所怀疑，特向高人请教。一般认为，同一种属的RNA、DNA在大小上是一致的，编码蛋白的基因序列也是一致的，个体的生长差别由很多的综合因素导致，同一种属的遗传物质其多寡会有差别吗？有差别也只是碱基排序有微小差别。因此 ...

1yangz 我是要做一个与凋亡相关的基因的凋亡通路那我的试验设计你们看看这样设计可以不？我先通过重组真核表达质粒转染细胞然后检测各项凋亡指标证明该基因确实可以诱导凋亡然后我从文献上得知该凋亡通路与ERK1/2 and p38 MAP kinases相关，那接下来的试验我该如何设计啊？凋亡需要做几项哪几种的啊？特别是关于ERK1/2 and p38 MAP kinases 凋亡通路的设计该如何进行谢谢了，祈望各路大侠不吝赐教我QQ是30406 ...

快乐无罪baby 能不能多举几个与凋亡有关的信号通路，如有相关文献更好谢谢！chuckdouble pathway from the homepage of CELLSIGNALlvmanrong 楼主，能看看原文吗？redbri 楼上的图片很全面，线粒体通路，内质网通路和Fas通路，不过这个图对于初学者来说，是很难的。可以分别搜一下这种通路的信号图，就比较容易理解的。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你 ...

bdvetywz 各位战友1想证实病毒感染小鼠后脑组织中是否存在凋亡并且要定量，有什么办法？2 如何做凋亡通路？需要测哪些指标，采用什么办法？magichunter 1.免疫组化，tunnel2.主要为western（caspase系列，bcl-2，bax，MAPKs，指标太多了）bdvetywz 主要可以测哪些指标magichunter 先做tunel吧，看看有没有凋亡再说。bdvetywz 已做，存在凋亡，现在想走通路，不知该做哪些？y ...

bdvetywz 各位战友，如何做凋亡通路？需要测哪些指标？如何证实动物是由于凋亡过度造成死亡的？谢谢!pingping05 你好！凋亡的检测指标非常多，比如说Hoechst 染色，形态学观察，流式，Tunnel,DNA-ladder等等，其中凋亡检测的金标准为TUNNEL和DNA-ladder,这两者 都可以定性和半定量表达凋亡的发生及其凋亡量的变化！magichunter 我觉得凋亡检测的金标准应该是电镜结果，tunnel不应算 ...

zhaohu552211 我正在做大鼠肝脏组织，现在做凋亡，请问做什么指标？我打算做DNA Ladder和AnnexV,请问用什么试剂盒比较好，价格先不考虑。我现在急求大鼠的ALR的序列，请各位多帮助，非常感谢zhaohu552211 请大家帮助:):)感谢大家Fasta921 Annexin V-FITC/PI 国产晶美的也不错！你检测的细胞没有其他荧光干扰吧，如果有GFP，不能用FITC，因为它们荧光通道相同。PS：把我血淋淋的教训告诉 ...

aspirin713 各位好，拜托大家给点建议我最近在做FCM，主要是测药物对黑色素肿瘤细胞的生长周期的影响，用的方法是FCM PI染色的方法。但是70%的乙醇固定之后，离心后可以看到有大量的细胞贴壁，把上清吸出去以后，可以看到沉淀留在底部，但是加入了PBS吹打均匀以后再离心。不管怎么样延长时间，或加大转速，就是没有细胞离到壁上，请问大家，这是怎么回事。应该如何避免上面这样的问题出现呢？！干细胞之星 固定的时候出问题了细胞估 ...

magichunter 最近做的实验是关于ROS诱导线粒体膜损伤，然后细胞色素c外流，BCL-2,BCL-XL表达减低，caspase-3，PARP被激活，最后导致细胞凋亡的这个通路。但是同时我也做了MAPKs(pERK,pJNK,pp38)的表达，发现也有统计学变化差异。请问是否可以将这两个通路写进同一片文章呢？怎样表述二者之间的联系呢？MAPKs是否作用于ROS通路的上游？请高手指点！chuckdouble magich ...