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        【求助】细胞凋亡

        丁香园论坛

        2385
        各位战友
        1想证实病毒感染小鼠后脑组织中是否存在凋亡并且要定量,有什么办法?
        2 如何做凋亡通路?需要测哪些指标,采用什么办法?
        1.免疫组化,tunnel
        2.主要为western(caspase系列,bcl-2,bax,MAPKs,指标太多了)
        主要可以测哪些指标
        先做tunel吧,看看有没有凋亡再说。
        已做,存在凋亡,现在想走通路,不知该做哪些?
        凋亡通路 检测指标
        线粒体通路 JC-1,caspase-9
        死亡受体通路 caspase-8
        内质网通路 bap 31
        先做caspase 3,如果结果为阳性,则分别作caspase8和caspase9,如果caspase8有结果,则做死亡受体通路,如:Fas/FasL,bid等,如果caspase9有结果,则做线粒体凋亡通路如cytochrome c的转位,线粒体膜电位变化,ROS,Bcl-2/bax,Bcl-XL/Bad等等。
        NF-kB跟凋亡是什么关系,如何证实?NF-kB跟IFN又是什么关系
        NF-kB跟凋亡是什么关系,如何证实?NF-kB跟IFN又是什么关系
        在脑中主要存在2类细胞:1类为神经元细胞,负责神经信号传递和大脑思维,信息储存等;第二类为胶质细胞,主要为神经元细胞提供营养支持和保护作用。
        当外界因素刺激胶质细胞,特别是小胶质细胞激活后,会在小胶质细胞内部激活IKK的磷酸化,然后诱发IkB的磷酸化,并进而诱导NF-kB转位到细胞核内,进而诱导基因表达(如:iNOS,COX-2等),表达后的基因转录成mRNA并进而翻译成蛋白质,如iNOS和COX-2蛋白,这些蛋白的功能就是生产炎症因子等,如NO,PGE2,TNF,IL等,然后分泌到细胞外,当这些炎症因子作用于小胶质细胞临近的神经元细胞时,会引起这些相邻神经元的凋亡,这被称之为炎症性神经细胞损伤。所以NF-kB的产生部位和诱导凋亡的部位是不同的。分别存在于2类细胞中。
        做凋亡相关基因表达情况检测也可以,美国Signosis有这方面的试剂,该试剂操作简单,像做ELISA酶免试验一样,它是将检测的mRNA分子转换成多个生物素标记的cDNA进行敏感检测,可定量分析。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】细胞凋亡

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