细胞百科

实验目的 了解新生牛血清在细胞培养中的作用，掌握血清筛选技术。 实验原理 牛血清是细胞培养基中的中药成份之一。在培养基中加入适量血清（10%），首先可以补充细胞生长所需的生长因子、激素、帖附因子等，其次它具有解毒作用，能解除脂肪酸、重金属和某些蛋白酶的毒性；再次，它还能中止胰酶的作用，并保护细胞免受机械损伤等。但是血清成分复杂，不同来源、不同批号生产的血清对细胞生长作用的差异较大。血清的保存期 ...

实验目的 1.能独立的进行细胞技术，会绘制生长曲线，了解细胞生长的发育特性。 2. 学习在科研中如何应用生长曲线。 实验原理 生长曲线的测定（计数法）是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，为培养细胞生物学特性的基本参数之一。一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平顶期，然后退化衰亡。 ...

1．培养IL-2依赖细胞株CTLL-2细胞或HT-2细胞（检测IL-2），或者IL-3依赖细胞株FDC-P1细胞或FL5.12细胞（检测IL-3）到对数生长期。2．取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml含1×104～2×104上述细胞之一的DMEM培养液（加10％小牛血清）。3．每孔加0.1ml系列稀释的待测细胞因子（IL-2或IL-3）样品或细胞因子标准品，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳 ...

1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培养液将K562细胞配成1×105/ml浓度。用同样培养液将PBMC配成1×106/ml浓度。 2．取96孔圆底细胞培养板，每孔加0.1ml K562细胞悬液；每孔加适量PBMC使效靶比为1：1～5：1，每种处理3个复孔；3个对照孔只加效应细胞；8个对照孔只加靶细胞；4个对照孔只加细胞培养液。每孔加20μl Alamar Blue；每孔总量为0.2 ...

1．取96孔细胞培养板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2～3小时让细胞帖壁（如果是悬浮细胞可直接进行下一步）2．用RPMI-1640培养液2～10倍递次稀释细胞因子标准品，根据情况2～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品和待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照 ...

1）用淋巴细胞分离液分离PBMC 1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。 2．离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离液的交界面。收集PBMC，用PBS洗涤细胞两次，每次离心150×g 10分钟。低速离心可以减少血小板沉淀，但细胞沉淀物较松散，去上清液时注意丢弃细胞。 3．将细胞悬浮于含2％～5％人 ...

一、实验目的：初步掌握供体-受体原生质体融合产生胞质杂种的方法，了解胞质杂种产生的原理和意义。二、实验原理：体细胞杂种有核杂种（nuclear hybrid）和胞质杂种（cybrid）之分。前者指双亲完整原生质体的融合产物，后者是指一亲本的去核原生质体，（即胞质体cytoplast）与另一亲本完整原生质体融合的产物，胞质杂种一般只具有一个亲本的细胞核，而具有两个亲本细胞质的遗传物质，胞质杂交可用来 ...

靶细胞的制备（分离肿瘤细胞和TIL） 1．无菌摘取肿瘤，置预冷的含抗生素的RPMI-1640培养液中，剪去结缔组织，剪碎瘤体至1～2mm大小。放置2～10分钟让组织块沉淀，吸去上清液。 2．将沉淀的组织块置5～10倍体积的消化液中，37℃中搅拌或振荡1～4小时或室温过夜。用力吹打组织块，即可得到单个细胞悬液。 3．离心400×g 10分钟，除去消化液。用5倍体积的RPMI-1640培养液悬浮细胞。 ...

一、 实验目的 观察各种组织细胞的切片，注意联系细胞形态和功能之间的关系； 通过观察显微结构，熟悉显微镜的原理和正确使用方法，提高分析、思考和解决问题的基本能力。 二、 实验用品 双目显微镜，动植物显微装片，擦镜纸。 三、 实验步骤 一切有机体的生命活动都是在细胞内或由细胞与细胞协同完成的。在细胞内，一切生理生化过程都代表着或影响到机体的生命活动，这些活动表现为极其严格的程序化和自动控制性 ...

1）铕荧光检测法标记靶细胞1．EuCl3的制备：称取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl搅拌至溶解，再用1N NaOH调节pH至4.0。加双蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存备用。2．用预冷的标记液将靶细胞浓度调整到5×106/ml，加50μl 10mg/ml硫酸葡聚糖，置冰浴中20分钟，其间摇晃数次。3．加入30μl 100mmol/L CaCl2溶液终止反应5分钟。4 ...

根据调亡的生化特征的检测方法 一、琼脂糖凝胶电泳 1）常规的琼脂糖凝胶电泳 方法一： 1．收集细胞（5×106）1000r/min，离心5min，去上清。 2．PBS洗一次，1000r/min，离心5min，去上清。 3．加细胞核裂解液500μl重悬细胞，50℃水浴，3～5h，不时振摇或37℃过夜。 4．加0.5ml平衡酚抽提，上下颠倒几次混匀，6000r/min，离心5min。 5．上清移至另一 ...

　　材料与方法　　1. 主要试剂：MTT、XTT、PMS、DMSO（Sigma公司产品)，RPMI　　1640（Gibco公司），氟尿嘧啶（上海旭东海普药业有限公司），注射用盐酸阿霉素（深圳万乐药业有限公司)，注射用丝裂霉素Ｃ（协和发酵工业株式会社），新生小牛血清（杭州四季青公司提供）。　　2. 细胞与细胞培养：人肝癌细胞系 BEL-7402置含10%新生小牛血清的RPMI　　1640培养液中，于 ...

4小时51Cr释放法检测CMC活性 1）用51Cr铬酸钠标记靶细胞 短期标记法 1．用RPMI-1640培养液洗涤107靶细胞，去上清液。用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。加入100μCi（3.7MBq）51Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。 2．如上用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次，每次400×g 10分钟。用50ml RPMI-1640培养 ...

一、实验目的 　　1 以分离叶绿体为例，掌握离心机的操作技术；　　2 通过光镜鉴定叶绿体的纯度及了解叶绿体形状；二、离心技术概述　　离心技术（centrifugal technique）是根据颗粒在作匀速圆周运动时都会受到一个向外的力而发展起来的一种分离技术。（一）基本原理 离心力和相对离心力　　1． 离心力（centrifugal force，Fc）是颗粒在一定角度速度下作圆周运动受到一个向外的 ...

1）结晶紫检测法1．在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培养箱中培养2～3小时，让细胞帖壁。2．用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品，根据需要3～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品或待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个，3个阳性对照 ...

H脱氧胸苷释放法1）标记靶细胞1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞配成2×106/ml，取10μCi（370kBq）HTdR加到1ml靶细胞中，37℃水浴标记4～6小时，每30分钟摇晃一次。2．用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次，每次400×g 10分钟。用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将细胞浓度调整为1×105/ml备用。2）HTdR释放实验1．在96孔圆底细胞培 ...

一、实验目的　　　1.了解绿色荧光蛋白和共聚焦扫描显微镜在细胞分子生物学中的应用　　2.学会使用质膜蛋白的分析软件。二、带GFP的质膜蛋白分选概述1．质膜蛋白的跨膜信号　　在粗面内质网上合成的蛋白质有两类：分泌蛋白和膜蛋白，分泌蛋白在内质网上合成之后通过多种信号切除后释放到内质网的腔中，进行下游途径的转运。膜蛋白较为复杂，它要靠疏水区滞留在内质网膜上。下面以酵母二价铁的转运蛋白（IRT）为例来说明 ...

　　人巨噬细胞可从外周血或经斑蝥激发的皮疱液中获取，也可从肺灌洗液或患者腹膜透析液中分离，但操作繁锁，得量不多。许多实验室在进行基础或配合临床研究巨噬细胞功能及其与疾病的关系、或筛检免疫增强药物和探讨其作用机制时，常选用小鼠腹腔巨噬细胞为研究对象，常用的检测方法如下。 　　（一）炭粒廓清试验 　　正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90％炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10％炭粒，据此给小鼠定量静脉注射印度墨 ...

用MTT检测法测定CMC1． Fen细胞培养于含10％小牛血清的RPMI-1640培养液中，在25cm2培养瓶中生长到接近汇合。用含0.05％胰蛋白酶，0.02％ EDTA的PBS消化细胞5分钟，洗涤后，用细胞培养液将细胞配成1×105/ml。2． 取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml细胞悬液，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培 养箱中培养24小时，让细胞帖壁。每孔加0.1ml效应细胞悬液 ...

一、普通光学显微镜观察方法 1）苏木素－伊红染色（HE染色法） 石蜡组织切片的HE染色 1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4μm切片。 2．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。 3．苏木素染色5min，自来水冲洗。 4．盐酸乙醇分化30s（提插 ...