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        细胞凋亡检测-形态学特征的检测方法

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        1200


        一、普通光学显微镜观察方法
        1)苏木素-伊红染色(HE染色法)
        石蜡组织切片的HE染色
        1.取材组织块,经固定后,常规石蜡包埋,4μm切片。
        2.切片常规用二甲苯脱蜡,经各级乙醇至水洗:二甲苯(I)5min→二甲苯(Ⅱ)5min→100%乙醇2min→95%的乙醇1min→80%乙醇1min→75%乙醇1min→蒸馏水洗2min。
        3.苏木素染色5min,自来水冲洗。
        4.盐酸乙醇分化30s(提插数下)。
        5.自来水浸泡15min或温水(约50℃)5min。
        6.置伊红液2min。
        7.常规脱水,透明,封片:95%乙醇(I)min→95%乙醇(Ⅱ)1min→100%乙醇(I)1min→100%乙醇(Ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3:1)1min→二甲苯(I)1min→二甲苯(Ⅱ)1min→中性树脂封固。

        2)甲基绿-派诺宁染色法
        1.新鲜取材组织固定液中4℃固定3~6小时。
        2.直接转入95%乙醇脱水和无水乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋。
        3.切片经二甲苯脱蜡,梯度乙醇水化至蒸馏水。
        4.置染色液中室温下染片约1h。
        5.取出切片,不经水洗,用滤纸吸干多余染液。
        6.插入丙酮中迅速分化。
        7.转入丙酮二甲苯(1:1)稍洗。
        8.二甲苯透明2~3次。
        9.中性树胶封固。

        3)Giemsa染色
        1.收集细胞(1×106),PBS洗1次。
        2.用细胞涂片离心机制成细胞涂片。
        3.甲醇固定3~5min。
        4.入Giemsa稀释染色液15~30min,冬天在37℃温箱中染色。
        5.用磷酸盐缓冲液分色,以镜下控制为准。
        6.涂片晾干后用中性树胶封片。

        4)瑞氏(Wright)染色
        1.收集细胞(1×106),PBS洗1次。
        2.用细胞涂片离心机制成细胞涂片。
        3.甲醇固定3~5min。
        4.用Wright液染色2min。
        5.入Wright磷酸缓冲液稀释液4~10min,然后用蒸馏水冲洗。此时如果颜色较深,可0.08%醋酸分化数秒钟
        6.直立晾干后,用中性树胶封固。

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