细胞百科

动植物细胞培养是指动、植物细胞在体外条件下的存活或生长。动植物细胞培养与微生物细胞培养有很大的不同（表14-1）。由于动物细胞无细胞壁，且大多数哺乳动物细胞附着在固体或半固体的表面才能生长；对营养要求严格，除氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外，还需有血清。动物细胞对环境敏感，包括pH值、溶氧、C02、温度、剪切应力都比微生物有更严的要求，一般须严格的监测和控制。相比之下，植物细胞对营养要求较动 ...

动物细胞体外培养的历史可追溯到1907年，美国生物学家Harrison在无菌条件下，以淋巴液为培养基成功地在试管中培养了蛙胚神经组织达数周，创立了体外组织培养法。1962年，其规模开始扩大，随着细胞生物学、培养系统及培养方法等领域的不断丰富和完善，动物细胞培养技术得到了很大的发展。发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法，利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗 ...

植物细胞培养是指在离体条件下培养植物细胞的方法。将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中，进行振荡培养，使组织分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖，获得大量的细胞群体。小规模的悬浮培养在培养瓶中进行，大规模者可利用发酵罐生产。植物细胞培养是在植物组织培养技术基础上发展起来的。1902年Haberlandt确定了植物的单个细胞内存在其生命体的全部能力(全能性)，使成为植物组织培养的开端。 ...

　　生物体是一个高度统一的整体，而的主要对象是生物体内的各种细胞，很显然，在整体条件下研究单个细胞或某一细胞群在体内（in vivo）的功能活动是非常困难的。细胞培养的意义主要在于两点，其一是人工培养条件易于改变并能严格控制，便于研究各种因素对细胞的结构、功能和各种生命活动规律的影响；其二是细胞在体外培养环境中可以长期存活和传代，可以比较经济地、大量地提供在同一时期、条件相同、性状相似的细胞作为实 ...

　　（一）细胞培养在临床病原学诊断中应用　　临床上多种病原生物如病毒、立克次体、衣原体、胞内寄生的细菌、原虫等的分离培养和药物敏感试验是通过细胞培养技术完成的，如人免疫缺陷病毒(HIV)和新近出现的严重急性呼吸综合征(SARS)病毒等就是通过细胞培养发现的。临床应用微量全血培养技术诊断HIV的感染，已用于儿童HIV垂直感染的早期诊断及可疑感染者的确认。　　1． 病毒的分离的常用细胞　　对病毒性疾 ...

仪器及药品 冰箱、天平（0.0001g）容量瓶: 1000 ml 500 ml、250 ml、100 ml、25 ml广口储液瓶：500 ml、250 ml、50 ml、25 ml烧杯：1000 ml 、500 ml 、250 ml、100 ml 、50 ml数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺 标签纸、胶水、50%酒精、95%酒精、1 mol/L盐酸、1 mol ...

为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，最佳的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在-70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键， ...

常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA 不整合到宿主 染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它 调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA 转染效率较高，在转染后24-72 小时内（依赖于各种不同的构建）分 析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β 半乳糖苷酶等来帮助检测。 ...

转染技术是指将外源分子如DNA，RNA 等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生 物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因 功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。影响转 染效率的因素有很多，细胞株本身的特性和活性，细胞培养条件，转染的DNA 或RNA 的质量， 转染方法，转染试剂的选择等。常规转染技术可分为两大类，一类 ...

转染效率收多种因素影响，主要因素有下面几个：1. 细胞培养物健康的细胞培养物是成功转染的基础。不同细胞有不同的培养基，血清和添加物。低的 细胞代数（ 都会有专门的说明。推荐在转染前24 小时分细胞，这将提供正常细胞代谢，增加对外源DNA 摄入的可能。一定要避免细菌，支原体或真菌的污染。2. 血清大多数培养基在使用前需要加血清。胎牛血清（FCS）经常用到，便宜一点的有马或牛血清。 通常的，血清是一种 ...

DEAE葡聚糖是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一，DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物，它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取，用DEAE-葡聚糖转染成功地用用于瞬时表达的研究，但用于稳定转染却不是十分可靠。磷酸钙共沉淀法因为试剂易取得、价格便宜而被广泛用于瞬时转染和稳定转染的研究，先将DNA和CaCl2混合，然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀，最后把含有沉淀的混悬液加到培养的细胞上，通过细胞 ...

1. 器皿洗涤玻璃器皿洗涤：新的玻璃器皿上附有游离的碱性物质，其洗涤方法是用1%的HCl溶液浸泡一昼夜，再用合成洗涤剂洗刷，然后用清水反复冲洗，最后用蒸馏水冲洗1～2次，干燥后即可使用。已使用过的试管、烧杯、三角瓶等的洗涤方法是，先将器皿中的残渣除去，用清水洗净，再用合成洗涤剂洗刷，用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1～2次。用过的吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品，需先放入铬酸洗涤液中浸泡两小时以上， ...

1. 愈伤组织诱导1.1 实验材料：烟草无菌苗叶片1.2. 诱导培养基：MS附加NAA2.0mg/L，BA2.0mg/L，蔗糖20g/L，琼脂6-7g/L，pH调整至5.8。1.3. 设备及工具：超净工作台；不锈钢镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯等；75%酒精。1.4 接种操作方法用75%乙醇将净化工作台擦洗干净，将接种所用的材料、工具、培养基等准备好放入工作台。打开紫外灯和风机至少15分钟后开始操作。 ...

1. 实验材料: 胡萝卜种子。2. 培养基2.1 胚性愈伤组织诱导培养基MS无机盐附加：烟酸0.05mgL-1、VB6和VB1各0.01mgL-1、甘氨酸3mgL-1、肌醇100mgL-1、激动素0.2mgL-1、24—D 0.1mgL-1、蔗糖20gL-1、琼脂2－5gL-1，pH5.8。2.2 体细胞胚形成培养基MS无机盐附加：烟酸0.05mgL-1、VB6和VB1各0.01mgL-1、甘氨酸 ...

1. 细胞悬浮系的建立1.1 实验材料胡萝卜上胚轴经黑暗培养形成的愈伤组织（可与体细胞胚诱导实验同时培养）。1. 2 培养基MS无机盐附加：烟酸0.05mg/L、VB6和VB1各0.01mg/L、甘氨酸3mg/L、肌醇100mg/L、激动素0.2mg/L、24-D 0.1mg/L、蔗糖20g/L，pH5.8。1.3 实验操作a. 按照培养基配方配制液体培养基，分装于200ml三角瓶中，每瓶30-5 ...

1. 原生质体分离1.1 实验材料: 烟草无菌苗叶片，烟草悬浮细胞系。1.2 实验操作a. 取生长3周的烟草无菌苗平展嫩叶，置于含有一薄层600mmol/L甘露醇-CPW溶液中，置于4℃黑暗下预处理6-8小时；b. 用吸管吸去预处理液，然后加入用CPW盐溶液配制，经过过滤灭菌的含有2％纤维素酶、0.4％离析酶、600mmol/L甘露醇的酶溶液，用封口膜将培养皿封严，置于暗处在24~26℃下保温酶解 ...

1. 植物材料: 马铃薯块茎2. 实验程序2.1 材料预处理a. 选取生长正常，无病虫害危害的马铃薯块茎，在自来水下冲洗干净，漓干；b. 取一只磁盘，将几层纱布浸湿垫在盘底，将块茎摆在其中，再覆盖浸湿的纱布，然后置于25-27℃黑暗下；c. 待块茎芽眼萌动，顶芽大约5mm长时，除去覆盖的纱布，将其移入光照生长箱中，其中光照强度为3000~4000 lx，光照时间每天16h，气温白天约为36℃，夜间 ...

胡　鑫undefined　高　梅1 　李绍军1 　陈坤明1 　梅　莉2( 1 西北农林科技大学生命科学学院 杨凌 712100; 2 西北农林科技大学教务处 杨凌 712100)摘要 细胞生物学是当代生命科学的基础学科 也是发展迅猛的前沿学科之一。为了促进 学生的实践动手能力和实践创新能力 配合细胞生物学理论课教学改革的不断深化 细胞生物学实 验教学改革已是大势所趋。该教研组经过多年的探索 从教学体系、教学内容 ...

方　瑾　于　敏　张惠丹　王桂玲　李　想　李晓东　刘　彤　周　颖　李　妍　邵阳光(中国医科大学细胞生物学教研室 沈阳 110001) 摘要 以问题为基础的学习(problem-based learning PBL)的教学方法是一种国际上广泛认同 和有效的医学课程模式 它将问题作为教学的基本因素 使学生在不断的提出问题和解决问题中完 成教学内容的学习 这种方法在培养学生分析问题和解决问题的能力、养成 ...

基础篇-无菌操作基本技术 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70% ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70% ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让 ...