愈伤组织诱导及器官发生

1. 愈伤组织诱导
1.1 实验材料：烟草无菌苗叶片
1.2. 诱导培养基：MS附加NAA2.0mg/L，BA2.0mg/L，蔗糖20g/L， 琼脂 6-7g/L，pH调整至5.8。
1.3. 设备及工具： 超净工作台 ；不锈钢镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯等；75%酒精。
1.4 接种操作方法
用75%乙醇将净化工作台擦洗干净，将接种所用的材料、工具、培养基等准备好放入工作台。打开紫外灯和风机至少15分钟后开始操作。
a. 在自来水管下将手洗净，然后用75%酒精将手消毒，再进入 超净工作台 开始接种操作。
b. 关闭紫外灯，点燃酒精灯，将镊子、解剖刀在酒精灯下烤干。
c. 取一无菌培养皿，然后用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中，并用锋利解剖刀将叶片切成2mm2左右的小片，然后将其接种于准备好的培养基上，一般每瓶接种4-5小片。
d. 快速封好瓶口，用记号笔写上姓名和接种日期。
e. 接种后的三角瓶置于24℃条件下，黑暗培养一周，然后在同样温度下分为光照和黑暗培养直至愈伤组织形成。
注意外植体切割时，动作要快，否则会造成失水而影响生长。为防止操作时失水也可在培养皿中滴几滴无菌水，然后将无菌苗置于其中进行切割。
2. 器官分化与植株再生
2.1 分化培养基
培养基采用MS基本培养基附加2.0mg/L BA、0.1mg/L Zeatin和0.5mg/l NAA。
2.2 实验材料
实验一诱导的两种类型愈伤组织。
2.3 操作步骤
a. 观察并详细记载实验一的培养结果，比较光照和黑暗条件下形成的愈伤组织状态的差异，根据理论课学习内容，分析其原因，理解培养条件下光照的调控作用。
b. 按照实验一的无菌操作程序，将愈伤组织转入新配制的分化培养基上，置于连续光照或16h/d光照，温度20－22℃条件下培养3－4周。
c. 培养3－4周后，调查芽分化情况，统计愈伤组织分化率、每个愈伤组织形成的芽数，比较不同光照下形成的愈伤组织对芽分化的影响。