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自体吞噬是细胞中一种降解和再生细胞组分的基本细胞过程，词语「autophagy」源自希腊词语「auto-」和吞噬（phagein），前者意思是「自我」(self)，而后者的意思则是「去吃」，而自噬表示的就是「自己把自己吃掉」（self eating）；自体吞噬这种概念是 20 世纪 60 年代提出来的，当时科学家们首次观察到细胞能够通过将自身内容物裹入到膜结构中来破坏内容物，从而形成袋装的囊泡结构，这种囊泡结构能够被运输到再循环小泡结构中进 ...

一般单次剂量的注射剂通过灭菌的方法即可达到无菌，而对于采用低温灭菌、滤过除菌或无菌操作法制备的注射剂或多剂量包装的注射剂，均应在处方中添加适宜的抑菌剂，以防止在制造、贮藏和使用过程中可能发生的微生物污染。抑菌剂具有抑制微生物细胞生长的能力，其过剂量也可能对人体有一定的安全性隐患，所以在注射剂处方中，抑菌剂的用量既要能抑制注射液中微生物的生长，又要求对人体无毒、无害。而对于加有抑菌剂的注射剂，仍要用适宜方法除菌， ...

蛋白磷酸化是多种信号转导途径中的重要环节，细胞内大部分重要的生命过程都涉及蛋白磷酸化。蛋白激酶很多，根据其底物蛋白被磷酸化的氨基酸残基种类，可将它们分为 5 类，其中丝氨酸/苏氨酸 (Ser/Thr) 蛋白激酶又可分为以下几类。（1）蛋白激酶 A（protein kinase A，PKA）即 cAMP 依赖性蛋白激酶。全酶存在胞浆，被 cAMP 激活后，催化亚基可① 调节代谢；②调节离子通道；③调节其他信号转导途径的蛋白；④ 进入细胞核调节基因表达。（2）蛋白激酶 C 即 Ca2＋和磷脂 ...

无论是保存还是运输，请避免反复冻融。反复冻融，冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构，导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变，从而降低抗体的结合能力，也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否，直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果，如果保存得当，Immune tech（苏州杰恩生物）的抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。1. 收到抗体和重组蛋白后的操作收到抗体和重组蛋白后（大部分抗体和重组蛋 ...

蛋白转运过程可以形象的描述为成千上万的蛋白质在一个细胞内按照有序的方式移动，就像街道和高速公路上的车辆，每一个细胞中的蛋白质被合成后都有它自己的目的地。质膜蛋白（PM）转运是所有蛋白转运过程中的重要组成部分。质膜是胞浆和细胞外环境之间的交界面，细胞骨架是细胞运输机制的一个重要组成部分，比如囊泡和内涵体在肌动蛋白微丝或微管上移动。从质膜将蛋白转运到其他位置或者将蛋白转运到质膜的过程很大程度上与蛋白本身细胞器 ...

羧肽酶 B (EC 3.4.17.2) 专一用于蛋白质 C-末端碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸、组氨酸）的水解；又称为肽酰-L-赖氨酸（L-精氨酸）水解酶；精蛋白酶。分子量为 35kD，等电点为 6.0，最适 pH 为 7-9。羧肽酶 B 是抗体碱性峰检测的特异酶，通过比较酶切前和酶切后的图谱来计算抗体碱性变体的比例，对于抗体的发酵工艺和纯化工艺稳定性的控制都具有重要的意义。而在抗体碱性峰的检测中，没有完全统一的标准，如酶解缓冲液酶的用量，酶解时的温度和时间等。而这些与酶的性 ...

羧肽酶 B (EC 3.4.17.2) 专一用于蛋白质 C-末端碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸、组氨酸）的水解；又称为肽酰-L-赖氨酸（L-精氨酸）水解酶；精蛋白酶。分子量为 35kD，等电点为 6.0，最适 pH 为 7-9。羧肽酶 B 是抗体碱性峰检测的特异酶，通过比较酶切前和酶切后的图谱来计算抗体碱性变体的比例，对于抗体的发酵工艺和纯化工艺稳定性的控制都具有重要的意义。而在抗体碱性峰的检测中，没有完全统一的标准，如酶解缓冲液酶的用量，酶解时的温度和时间等。而这些与酶的性 ...

bluesky0902 请教各位：为什么条带这么不清晰呢？而Marker还可以，是电泳的问题，胶的问题还是染色的问题呢？刚开始做，是在搞不明白~·电泳是非变性聚丙烯，染色步骤如下：染色步骤：1. 固定液：100%冰醋酸2ml，无水乙醇40ml加水至400ml，摇7-8min2. 银染液：0.6g硝酸银加水至300ml，摇12-15min3. 加水洗1-2次，每次1min4. 显色液：6g NaOH，4ml甲醛，1%硫代硫酸钠800ul，加水至400ml ...

liuxinfanjian 提两个幼稚的问题：1、如果用hela细胞或者293细胞做工具细胞，做双荧光素酶的时候，3'-UTR端的扩增要以hela细胞或者293细胞的cDNA为模版呢还是以大鼠cDNA为模版呢？ 我我的我我的模型是大鼠的。2、mimics和inhibitor是不是只要大鼠和人的miRNA序列一致，就可以在人和大鼠之间通用呢？ zhujoker 、如果用hela细胞或者293细胞做工具细胞，做双荧光素 ...

liufengxi 最近使用pEGFP(增强型绿色荧光蛋白基因)做的转染，虽然转染细胞阳性率不低，但是绿色荧光蛋白表达跟以前相比较很少（转染剂量是一样的）。最初怀疑是细胞状态问题，重新复苏细胞后，没有改善；后将Hela细胞换为HepG 2细胞后，结果仍然不理想。我怀疑是不是我们的质粒突变了呢，就是转录或者是表达蛋白的能力下降。因为有一批提的质粒做的转染根本没有表达。请大虾们给支支招哈！思路迪病毒 liufengxi wrote: ...

d调华丽 求大肠杆菌 lpp（脂蛋白）启动子的序列~谢谢吴佰霖 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/946175下载基因组fasta序列，计算lpp在里面的位置d调华丽 吴佰霖 wrote:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/946175下载基因组fasta序列，计算lpp在里面的位置怎么计算？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师 ...

lilililiwoody 比如我查的资料D-丝氨酸的分子量是105.09，白介素-1的分子量是17KD，载脂蛋白E的分子量是34145D，它们的单位不同，我怎么比较它们的分子量大小？谢谢各位大侠，**了！woxingwosu D：daltonKD: kilodoltons, = 1000 D,是D的一千倍lilililiwoody 谢谢版主！本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

panxiaoyun1115 各位大侠，请问MMP13可以做明胶酶谱法，用来区分MMP13的前体酶原和活化的MMP13吗？非常感谢！急盼！zhujoker 明胶酶谱法主要是用来检测有活性的MMPs，所以理论上应该可以区分开的panxiaoyun1115 版主，有活性的MMPS就是指活化的MMPS吗？或者是指：pro-mmps和活化的mmps，只要没有被特异性抑制物（TIMP）结合，都称为有活性的MMPS？谢谢！峰朗月白 回复楼上 ...

tony3436 本人是个入门级新手，系里课题极少，没捞着练手，实验技术匮乏，特请高手指点：我想研究一蛋白的表达量及定位。目前考虑给蛋白加一GFP标签。但具体的蛋白序列，引物设计等步骤一无所知。希望高手赐教。不甚感激！kinguangjun 你好！你可以考虑用clontech的pEGFP-C1或者pEGFP-N1真核表达载体，把你所要做的蛋白和GFP融合在一起，然后转染细胞，就可以判断其蛋白的定位了，若要判断其表达量做We ...

diving 做转录因子的WB必须要用核蛋白提取吗？平时的总蛋白提取包括核蛋白吗还是核被离心掉了？有时候好像有人直接提取总蛋白做磷酸化的检测了，为什么？xhjggl 还是选择使用专门的核蛋白提取试剂盒吧，一般而言，总蛋白提取时核蛋白的提取效率不高diving 提取总蛋白然后做的磷酸化水平比如P-Stat 有意义吗xhjggl 总蛋白然后做的磷酸化水平效果不好diving 谢谢！paroxysm 看情况吧。比如STAT3是通过705和 ...

伊果 目前我通过原核表达系统获得一个可溶性蛋白，是一个原核生物蛋白，目的是想看看它是否为一真核生物死亡受体的配体。请问需要做什么实验，提供怎样的证据才有说服力？谢在先！LoftyMan 1. 该蛋白刺激细胞，观察受体和受体下游分子的表达情况有没有变化2. 该蛋白刺激细胞，该死亡受体的激活会引发什么？知道的情况下看该情况是否发生3. Luc4. IP加IB5. confocal和FRET伊果 若用蛋白直接刺激细胞，蛋白需要在固相包被么？死亡受体是 ...

jasedm 看到文献好多都说，某蛋白被磷酸化，其活性增高，继而磷酸化下游的信号分子。AKT激酶活性测定和Western blot检测其磷酸化水平两者都能说明AKT的活性吗？有什么不同吗？两者有没有可能测定出来的结果不同？例如说AKT磷酸化水平没变化，但是激酶活性检测结果是活性降低？AKT磷酸化就代表它有活性吗？谢谢高手指点xiaoxiao53 很有价值的问题，AKT磷酸化就应该是有活性吧阿兰梦 测活性和测磷酸化的蛋白表达 ...

will99_04 小弟想用pGL3-vector basic作为载体装载一个启动子片段，该启动子片段需要经PCR克隆，故要设计引物，在引物的5‘端加入内切酶位点。经过查询后发现可以用一下三种内切酶：KpnI，NheI，MluI查TAKARA的产品目录后发现，这三种酶的反应温度均为37°，但所用缓冲液不同。提问：有没有适合两种酶（从上述三种同时反应的universal buffer（通用缓冲液）？devil19840 查看taka ...

jingyue777 我最近做了变形链球菌超声提取上清蛋白的实验，离心后取上清，测定蛋白浓度为0.81mg/ml，我想请问有没有哪位做过类似的实验，如何判断超声破壁是否成功？一般提取的上清蛋白浓度为多少是正常的？谢谢woxingwosu 没有做过变形链球菌，只做过大肠杆菌的，不知道是不是一样的道理。在大肠杆菌中，只要超声到看起来超声液黏着（效果好可能会澄清）就算是可以。不过这个浓度是不是有点低？或者你的超声液加得比较多所 ...

allenylq 各位战友，最近投了一篇文章，reviewer的提了一个意见：“Antibodies to GPCRs are notoriously unreliable, and this data would be strengthened by further demonstrating presence of the receptor message in this cells , and/or showing specificity of the antibody used.”我是用western blot检测该受体的 ...