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        【求助】证明目的蛋白是已知受体的配体的权威证据是什么?

        丁香园论坛

        2080
        目前我通过原核表达系统获得一个可溶性蛋白,是一个原核生物蛋白,目的是想看看它是否为一真核生物死亡受体的配体。请问需要做什么实验,提供怎样的证据才有说服力?谢在先!
        1. 该蛋白刺激细胞,观察受体和受体下游分子的表达情况有没有变化

        2. 该蛋白刺激细胞,该死亡受体的激活会引发什么?知道的情况下看该情况是否发生

        3. Luc

        4. IP加IB

        5. confocal和FRET
        若用蛋白直接刺激细胞,蛋白需要在固相包被么?死亡受体是fas,引发细胞凋亡。另外,若我获取的蛋白是配体的话,那么验证它与fas的结合是否用体外方法如IP或pull-down要比体内的方法如双杂交或FRET更好些?
        Biacore可以直接检测蛋白蛋白相互作用(定性定量)。
        论说服力的话,蛋白结晶并X射线晶体衍射,直接把结构解了,那就完美了。
        但是不是配体的关键还是在于它能不能引起受体下游的功能,关键还是要检测fas下游的蛋白。
        euthor_hsu wrote:
        Biacore可以直接检测蛋白蛋白相互作用(定性定量)。
        论说服力的话,蛋白结晶并X射线晶体衍射,直接把结构解了,那就完美了。
        但是不是配体的关键还是在于它能不能引起受体下游的功能,关键还是要检测fas下游的蛋白。

        嗯,做结晶是我当初一个完美的设想,现在还是想先做一下功能。还是那个问题,若是用蛋白作为配体作用细胞,蛋白需要固定么?

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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