PCR引物设计

1自从1985 年Karny Mullis 发明了聚合酶链式反应以来，PCR 技术已成为分子生物学研究中使用最多、最广泛的手段之一，而引物设计是PCR 技术中至关重要的一环。使用不合适的PCR 引物容易导致实验失败：表现为扩增出目的带之外的多条带（如形成引物二聚体带），不出带或出带很弱，等等。现在PCR 引物设计大都通过计算机软件进行。可以直接提交模板序列到特定网页，得到设计好的引物，也可以在本地计算机上运行引物设计专业软件。一般来说，专 ...

我作RT-PCR, 这个引物实在是设计不好，是TOPO II ALPHA其mRNA如下：1 aggttcaagt ggagctctcc taaccgacgc gcgtctgtgg agaagcggct tggtcggggg61 tggtctcgtg gggtcctgcc tgtttagtcg ctttcagggt tcttgagccc cttcacgacc121 gtcaccatgg aagtgtcacc attgcagcct gtaaatgaaa atatgcaagt caacaa ...

PCR引物设计的11条黄金法则1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq DNA ...

前一段时间贴出一段基因想请大家帮忙设计引物，可惜大家都太忙。我自力更生，学着设计了一下，不知怎么样，希望各位赐教！！！基因序列：1 gtattaaagg gaccggagcg gggcagttcc cgacgccgca gcgctcgctt tcccttccct61 cctctctggc cctccctcct cccacccact ggctccctcc cccagcgctc tccagtttct121 gtgccccagg agctacgcga cagtcttcca ...

我要对大鼠的IL-18RβmRNA进行RT-PCR现设计了如下两条引物：引物对1：扩增区域 1～522 退火温度59℃。F1ATGCTTAAATCCAGATGTGGCGR1CCCATAAAACAGGGCTACCTCC引物对2：扩增区域600～1113 退火温度58℃F2AGGCTTGTACGTGTGCGATTACR2TTCAATCCAGTGCCAGTAGAGC请各位高手帮我分析分析这两对引物怎样，替我指点指点！谢谢！以下 ...

我想用RT-PCR扩增出某种纤毛虫的制动抗原基因的全长cds通过ncbi查到它的全长cds为(1329bp):ATGAAATATAATATTTTATTAATTTTAATTATTTCTTTATTTATTAATGA ATTAAGAGCTGTTCCATGTCCTGAT GGTACTTAGACTCAAGCTGGATTGA CTGATGTAGGTGCTGCTGATCTTGGTACTTGTGTTAATTG CAGACCTAAT TT ...

1: AF075241. Sus scrofa prepro... LinksLOCUS AF075241 451 bp mRNA linear MAM 17-MAY-2000DEFINITION Sus scrofa prepro-orexin mRNA, complete cds.ACCESSION AF075241VERSION AF075241.1 GI:3328338KEYWORDS .SOURCE Sus scrofa (pig)ORGANISM Sus scrofaEukaryota; Metazoa; Cho ...

这是我设计的P53基因引物blast结果,请教高手这引物可用吗?Distribution of 104 Blast Hits on the Query Sequence--------------------------------------------------------------------------------Score ESequences producing significant alignments: (bits) Valuegi|51475426|ref|XM_496493.1| PREDICTED: Homo sapiens s ...

各位园友大家好，我想从蛋鸡的腹脂中提取RNA，进行RT-PCR,以beta-actin为内参，测定蛋鸡腹脂中激素敏感脂肪酶（HSL）和脂蛋白脂酶（LPL)mRNA的丰度.现需要设计几对引物。扩增激素敏感脂肪酶（HSL)基因的引物，扩增脂蛋白脂酶(LPL)基因的引物以及内参beta-actin的引物。beta-actin分别在这两种酶表达中作为内参时它的引物是否也不一样，会因酶而异。我从NCBI上查到这两种酶以及内参在禽 ...

１．小硕我正在做关于维生素Ｄ３受体（ＶＤＲ）多态性实验，准备用ＢｓｍＩ酶切２．文献上多用Ｍｏｒｒｉｓｏｎ的经典引物：Ｐ１5′CAA　ＣCA　AGA　CTA　CAA　GTA　CCG　CGT　CAG　TGA3′和Ｐ２AAC　CAG　CGG　GAA　GAG　GTC　AAG　GG3３．但是Ｐ２在pubmed上ＢＬＡＳＴ后如下|74268229|gb|BC103387.1| Bos taurus similar to calcium acti... 34.2 4.1gi|77735552|ref|NM_001034300.1| ...

TGFβ1 上、下游引物序列为: 5'-GGACTACTACGCCAAAGAAG-3 ’5’-TCAAAAGACAGCCACTCAGG-3’长度为294 bpTGF-1 - CGTGGAAATCAATGGGATCAGGGCCATGAGGAGCAGGAATGF-1 - forward primer: 5'-ACCTGCAAGACCATCGACATG-3';reverse primer: 5'-CGAGCCTTAGTTTGGACAGGAT-3';TGF-1 sense prime ...

我想做一种蛋白的mRNA水平检测，只想知道mRNA水平量的变化，不继续做表达等了，拜托了2005年5月1日引物1sense:5'TGCCTGGCTGAGCGTTACanti--:3'TTTCCTGGTGTTCAGAGTCG引物2sense:5'TGCCTGGCTGAGCGTTACanti--:3'AGATTGGTGTCGGGTTGT引物3sense:5'AGTGCCTGGCTGAGCGTTACanti--:3'TTT ...

大侠，你好，我是一位涉世不深者，用TAKARA公司的3'RACE试剂盒刚克隆完3'RACE的序列，大概1000bp，现在想同样用5'RACE的试剂盒把5'末端做出来，但是因为TAKARA的试剂盒要设计5条引物，一条反转录引物，两对PCR引物，我觉得有点难，请哪位大侠告诉我设计这几条引物应该注意什么，该如何设计，我把序列也贴出来，希望哪位大侠帮帮忙，有时间帮我分析一下这段序列，当然如果帮我设计这5条引物来，小生真是不甚 ...

引物设计对于在做PCR实验的同志们来说是必不可少一项。本人从开始做PCR由不会设计引物到会，其中感概颇多。这里就PCR引物设计的几个基本法则谈谈，和大家分享一下。引物设计的基本法则1. 引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。2.引物 ...

PCR引物设计及软件1. 引物设计的原则引物设计有3条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。具体实现这3条基本原则需要考虑到诸多因素，如引物长度（primer length），产物长度（product length），序列Tm值 (melting temperature)，引物与模板形成双链的内部稳定性(internal s ...

PCR 引物设计及软件使用技巧张新宇，朱有康，高燕宁（中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介绍使用软件设计PCR 引物的技巧。在PCR 引物设计原则的基础上，详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了比较。一般性引物自动搜索可采用“Premier Primer 5”软件，而引物的评价分析则可采用“Oligo 6”软件。关键词：PCR；引物设计中图分类号：Q524 文献标识码： 文章编 ...

因为要做PCR了，但不会设计引物，今天下午在DXY和Pubmed上乱看了一下午，把自己的疑惑写出来，向大家请教。遇到的问题：在引物设计时，找不到需要物种基因的序列，或者想能否设计一个引物，能够在不同物种之间共用（考虑到同源性的存在）。如果能够实现，就一方面可以通过其他物种的信息设计自己需要的引物，另外，也可以合成一个引物在多种细胞动物模型上通用，减少开支。以我下午具体的例子为例：我需要大鼠、小鼠和人的mitofus ...

TITLE Organization and structure of the mouse interleukin-2 geneJOURNAL Nucleic Acids Res. 12 (24), 9323-9331 (1984)PUBMED 6240025COMMENT PROVISIONAL REFSEQ: This record has not yet been subject to finalNCBI review. The reference sequence was derived from X01772.1.On or before Dec 1 ...

引物（primers)：引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个引物与感兴趣区域另一端的另一条DNA模板链互补。引物的重要性：在整个PCR体系中, 引物占有十分重要的地位。PCR的特异性要求引物与靶DNA特异结合，不与其他非...关键词：要点注意设计结构模板延伸引物（primers)：引物是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与感兴趣区域一端的一条DNA模板链互补，另一个 ...

某基因的序列如下，我设计了一对引物，5 TCGGTTTTCACTGGTTCTCATCC 33 T CGCACTCCTTTCTCTCGCAATG 5想扩增的目的片断是3629－4799 （1170 bp，）不知道能否，请大侠们帮忙看一下，3601 ttttttaatt tcaggatatg gagcttcttc ggttttcact ggttctcatc cagtcctggc3661 tgaccccagt gcaataccta agcaaggtgt ttacaaacaa cc ...