PCR技术原理

体外培养细胞和组织细胞DNA PCR反应模板的制备 1g哺乳动物细胞，可以得到约2mg DNA。【试剂与配制】（1）磷酸缓冲液；（2）酚/氯仿/异戊醇25:24:1；（3）7.5mol/L醋酸铵；（4）100％和70％乙醇；（5）TE缓冲液；（6）消化缓冲液：100mmol/L NaCl、pH8.0 10mmol/L Tris.Cl、pH8.0 25mmol/L EDTA、0.5％SDS ...

RNA标本PCR反应模板的制备（一） 血液单核细胞RNA制备（1） 用密度梯度法制备血中单核细胞；（2） 取出单核细胞用PBS洗2次，每次300g离心5min；（3） 洗后的单核细胞沉淀用200～400μl含0.5% NP-40的预冷的IHB（0.01% DEPC配制）重新悬起；（4） 离心10sec沉淀细胞核，若有必要，可收集细胞核DNA，但应洗去DEPC；（5） 将上 ...

凝胶中PCR产物再扩增标本PCR反应模板的制备 有时DNA模板来源较困难，如病毒核酸或cDNA，一次PCR成功后，要想多获得一些PCR产物，用原模板较浪费，此时可用凝胶中PCR产物作为模板，用低熔点胶回收后溶解直接用于PCR。【操作方法】（1） 用合适浓度（1%）的低熔点胶分离扩增产物；（2） 切下预期的产物，放于微量离心管中，可保存于4℃或立即溶解应用； ...

内参照定量PCR PCR可分析极微量的DNA，并可同时扩增多种序列，已应用于基因转录水平的研究。尽管PCR是一种较理想的核酸定量方法，但实验方案的选择对PCR定量的成功与否极为重要，因为PCR是一个指数过程，控制反应率的任一参数的微小变化都会显著影响产物的生成量，在这些参数被精确优化与控制后，也还可能出现不同反应管中的产物量的差异，而导致结果的偏差。0 设置内参照是理想的定量方法它 ...

PCR反应的五要素 ：引物、酶、dNTP、模板、Mg2+浓度

　　基因扩增技术（PCR）聚合酶链反应（polymerase chain reaction简称PCR）又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法

　　基因扩增技术（PCR）聚合酶链反应（polymerase chain reaction简称PCR）又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法

qPCR中的P代表什么？Polymerase，聚合酶。如果qPCR少了聚合酶，没定量PCR还怎么做。下文就介绍了一种做法。

PCR是分子生物学科研人员必做的实验，为了扩增目的基因，经常要对PCR的体系进行“摸条件”，特别是一些GC含量高的目的基因或者DNA纯度不高的样本! “摸条件”成为PCR实验最费时费力的工作！虽然市场上有很多PCR的MasterMix试剂，将酶、dNTP、反应缓冲液混合在一起，很方便客户的使用，但仅仅是简单的混合，极少公司对MIX的应用范围进行广泛的实验和优化，只能做一些不复杂的PCR。

通过生动的图示，具体的详细的介绍引物设计软件的使用方法。

通过生动的图示，具体的详细的介绍引物设计软件的使用方法。

在实验室进行分子克隆实验时，经常需要合成大量的引物，而这些合成的引物首先要进行适当的稀释才能使用。正确的稀释方法，不仅能节约引物，防止引物失活，更能防止引物污染。

PCR反应中，两条引物上的互补碱基相结合形成的聚合体，如果减肥或者避免引物二聚体，提高PCR扩增的效率，下面的文章给出了一些建议和方法。

PCR的假阳性问题深受重视，但PCR假阴性问题相对于临床检测更为严重。涉及了与PCR实验的几乎所有人员和技术环节，十分复杂。

PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。寻找污染原因并采用适当的方法检测、防止污染显得尤为重要。

DNA聚合酶要进行DNA聚合反应时一定要有引子 （primer），因为它只能以引子所提供的3'-OH为起始点进行延伸 （extension） 的工作，而不能就地重新合成新的DNA （de novo synthesis）。

PCR是极为重要的DNA增殖技术，应用层面非常广，其中包括了核酸探针的制备。如果一段DNA已经被次选殖至载体上，要以PCR扩增这段DNA时，可根据质体multiple cloning sites两边的序列，选用适当的核酸引子 （universal primers） 进行扩增反应；比较常用的引子包括SP6, T3 与T7 promoter primer, M13/pUCforward与reverse primers等；若有特殊考量，也可以使用序列专一性核酸引子对。进行PCR反应时若同时添加 [α-32P]dNTP或DIG-11-dUTP,所增殖的DNA即被32P或DIG所标定，所以PCR是制备核酸探针非常便捷好用的方法。

聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction ,PCR）是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍，使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。

根据已知的脊椎动物某一特定基因的氨基酸序列的保守区域设计简并引物，利用RT-PCR技术获得该基因的核心片断，将该片断分离纯化后与T载体连接，转化大肠杆菌，挑取白色菌落，经 PCR反应鉴定得到阳性克隆，送阳性克隆的PCR产物去测序，从而获得目的基因的cDNA核心片断的序列。

聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction ,PCR）是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍，使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。