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RACE(rapid

相关专题 RACE技术的简介cDNA完整序列的获得对基因结构、蛋白质表达、基因功能的研究至关重要。完整的cDNA 序列可以通过文库的筛选和末端克隆技术获得。末端克隆技术是20世纪80年代发展起来的。RACE(rapid-amplification of cDNA ends)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术。RACE的优点与筛库法相比 ...

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DNA 计算分析(DNA Computational Analysis)

相关专题 Sequence Analysis. Automated (Semi-Automated) Sequencers generate a four-color chromatograms on the results of the sequencing gel as well as a text file of sequence da ...

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表达基因克隆技术与图谱构建策略研究

相关专题 人类基因组计划的主要任务之一就是要从大片段基因组区域或整条染色体DNA 上鉴定出基因表达序列(gene expressed sequences)或转录单位(transcription units)。在人类基因组30亿个碱基对中,发生转录的表达序列(即基因)仅占总序列的3~5%。基因组中 绝大部分是基因间隔序列(intergenic ...

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质粒[]plasmid 的制备

相关专题 质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体,它在基因操作中具有重要作用。质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术。 质粒的提取方法很多,大多包括3个主要步骤:细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和纯化。本实验以碱裂解法为例,介绍质粒的抽提过程。 实验目的:掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用。 实验材 ...

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大肠杆菌glgC基因的克隆、序列分析与定点突变

相关专题 董 云 洲 王 晓 峰 贾 士 荣 摘要:通过PCR,从E.coli K12 Y1090株系中扩增获得glgC基因,插入pUC19的PstI和SacI 位点之间,得到重组质粒pAGP。对所克隆的glgC基因进行全序列测定,结果表明,与已发表的序列相比,有7个核苷酸发生了改变,核苷酸顺序的同源性为99.4 %; 推导的氨基酸序列的同源 ...

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DNA的制备

相关专题 DNA是生物的主要遗传物质,因而DNA的制备是基因工程的基础。由于生物形式的多样性(细菌、植物、动物),以及DNA在生物体中存在形式的差异(染色体、线性DNA、质粒),因此,制备DNA的过程和方法也不相同。一、DNA在生物体中的存在形式1.染色体DNA 是生物体遗传信息的主要载体 _原核生物染色体:结构简单,储存的 ...

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核酸分子杂交的概念、基本原理、探针及类型

相关专题 分子杂交的概念及基本原理主要内容:一、分子杂交的概念 二、分子杂交基本原理 (一)DNA变性: 1、DNA变性的方法2、增色效应3、溶解曲线4、融解温度5、影响Tm值的因素。 (二)复性:退火一、分子杂交的概念: 分子杂交(molecular hybridization)指具有一定同源序列的两条核酸单链(DNA或RNA),在一定条件 ...

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基因重组中不可不知的知识点精简概括

相关专题 以下,你将看到的是基因工程中不可不知的知识点精简概要。基因重组学什么?我觉得吧,基本概念、实验方法、在基因工程中的位置、与其他实验的关联、用途等等要清楚。如果您对这一技术了解不太明晰,这里一点那里一点的,建议看看。一、重组DNA技术相关概念 (一)DNA克隆 克隆(clone):来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 克隆化(clo ...

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小牛胸腺DNA的制备

相关专题 一、实验目的 1. 了解DNA的存在状态,增加感性认识。 2. 掌握DNA的制备方法以及细胞分级,细胞核制备,细胞膜裂解和解离DNA-蛋白复合体(DNP)的技术。 3. 学习用紫外分光光度计测定DNA含量的方法。 二、实验原理 核酸是重要的生物大分子。在细胞核内,核酸通常是与某些组织蛋白质结合成复合物,即以脱氧核糖 ...

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Avoiding DNA Contamination in RT

相关专题 A frequent cause of concern among investigators performing quantitative RT-PCR is inaccurate data due to DNA contamination in RNA preparations. Although DNA contaminat ...

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Invitrogen RT

相关专题 反转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction RT-PCR)是一项有效的和广泛使用的研究工具,它可以用于多种应用,包括RNA检测、基因定量以及克隆。随着这项技术的逐渐普及,针对提高速度、方便性和多用途性的革新方案的需求,也变得越来越迫切。作为反转录的领先者,In ...

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提高RT

相关专题 摘要 RT-PCR 已经成为研究者确定感兴趣的器官、组织或细胞中mRNA 转录本出现、结构和表达水平的基本方法。RT-PCR的基本步骤包括:首先对样品中出现的所有mRNA 合成一个cDNA拷贝,接着扩增感兴趣的基因。因为两个步骤中使用的反应缓冲液不能兼容,所以这两个步骤(RT 和PCR)通常分别进行。即使有些试剂盒能将两个步骤 ...

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Protocol for Real

相关专题 This protocol describes the detailed experimental procedure for real-time RT-PCR using SYBR Green I as mentioned in Xiaowei Wang and Brian Seed (2003) A PCR primer ban ...

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Southern Blot Analysis(from Baker lab, university of Florida

相关专题 DNA PrepPrepare DNA via your favorite method. You may find a protocol underMini Yeast Genomic Prep.Restriction Digest1.Digest DNA with appropriate restriction enzyme. ...

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采用优化红球菌的地高辛标记探针的DNA印迹方案

相关专题 警示:在我们的手册中介绍的实验可能具有潜在的危险性,要求操作人员具有相当的安全训练、特殊装备、以及相关安全部门的监督。作为实验操作员的你承担全部的责任、义务和由于实施安全步骤和措施带来的危险。麻省理工大学没有责任、义务或承担由于实施本材料中内容所引起的危险xian o’brien 大公无私地为此测试,优化和作图黑体字表示的试剂列在方 ...

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Genomic (Plant) DNA: Restriction Digestion for Southern Blot

相关专题 Background on the art of getting beautiful Southerns:There are several things to consider. (1) Digesting enough DNA. (2) The DNA must be digested to completion; i.e. n ...

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Southern blotting实验

相关专题 PURPOSE: TolocateaparticularsequenceofDNAwithinacomplexmixture(locateonegenewithinanentiregenome) SeparatemixtureofDNAsequencesonagelprobewithspecificDNAsequence(gene) ...

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Primer Design(Manual and Automated Primer Design for SEQ and

相关专题 General Primer General Primer Design Guidelines Note the 5’-3’ direction of the contig. Locate primers 100 to 200 bp from the feature. Pick primer from ≥ 2x high qu ...

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检测鼠肝肌动蛋白(p—acdn)基因

相关专题 (一) 鼠肝DNA的制备原理 DNA是储存遗传信息的物质,是遗传的物质基础,它与生命的正常活动如种厉遗传、生长发育有密切关系。其结构与功能的研究是当前分子生物学研究的主要内容之一。核酸广泛存在于生物中,DNA含有生物体的全部遗传信息,在生物组织中以核蛋白(DNP)形式存在。真核生物中,DNA主要存在于细胞核中,核外也有少量, ...

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真核生物高分子量DNA制备方法

相关专题 实验原理 :利用液氮对植物组织进行研磨,从而破碎细胞。细胞提取液中含有的SDS溶解膜蛋白而破坏细胞膜,使蛋白质变性而沉淀下来。EDTA抑制DNA酶的活性。再用酚、氯仿抽提的方法去除蛋白,得到的DNA溶液经乙醇沉淀。 实验材料:新鲜植物叶片 实验步骤:1.取4g新鲜叶片,在液氮中研磨成粉末状(越细越好)。 2.转移至50ml离心管 ...

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