DNA基础知识

RNA酶保护试验((RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点：1． 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损失，使灵敏度下降，而RPA将所有杂交体系进行电泳，故损失小，提高了灵敏度。2． ...

一、原理 细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋白的分子量，可筛选阳性表达的重组体。二、试剂准备1、30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29 ...

一、杂交通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的二条单链之间进行。由于DNA一般都以双链形式存在，因此在进行分子杂交时，应先将双链DNA分子解聚成为 ...

我们每天都在做实验，接触到的最多的试剂莫过于水，它通常贯穿我们的整个实验过程。也许正是因为水的普遍和易得，往往让我们忽略了它对实验结果产生的影响。正确选择纯水仪器可以帮助科研工作者避免许多不必要的麻烦。在挑选一款合适的纯水器之前，我们应该首先了解我们的实验需要什么样的水。不同的国际组织如ASTM、CLSI、ISO等制定的水质标准也有所不同，所以很难明确地划分实验室用水的等级。一般来说，我们采用下面 ...

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琼脂糖核酸电泳1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架好梳子；2.根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般20~30 ml）；3.放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固；4.室温下30~45分钟后凝胶完全凝结，小心 ...

血清学筛选克隆新抗原/新基因一、 以下内容需要登录后才能完全查看，请您登录马上登陆| 企业会员注册 ...

1.引物是如何合成的？答：目前引物合成基本采用固相亚磷 以下内容需要登录后才能完全查看，请您登录马上登陆| 企业会员注册 ...

先进科技 抢先体验你还在为你的核酸提取发愁吗？你还在为你的科研经费发愁吗？东西越贵就一定越好吗？不！体验一下BioTeke给你带来的从核酸提取、PCR、RT-PCR到荧光定量的完美解决方案吧！¤ 你知道如何保护样品的RNA不降解吗？已经有很多人在用了，如果你还不知道，赶快行动吧！ RNAfixer无液氮RNA样品储存液：常温运送样品的最佳选择，保护RNA不降解，37℃一天，25℃一周， ...

E.coli的乳糖操纵子（元）含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节基因I。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子（元）受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解（代谢）物基因激活蛋白（CAP）结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实 ...

试剂1M LiCl 50% PEG3350 (氯化锂转化法只能PEG3350不能用PEG8000PEG3350在北京莱博生物有售80元/100克)2mg/ml salmon sperm DNA / TE（10mM Tris-Cl pH8.0 1.0mM EDTA）-20℃保存注：醋酸锂对毕氏酵母无效对酿酒酵母有效，仅氯化锂有效；PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用。感受态毕氏酵母的制备1. ...

General GuidelinessiRNA targeted sequence is usually 21 nt in length.Avoid regions within 50-100 bp of the start codon and the termination codonAvoid intron regionsAvoid stretches of 4 or more bases s ...

基因构建策略下面我们介绍一下转基因和基因打靶载体构建策略的一般原则。 ...

1) Transfect cells.2) Culture cells 1-3 passages in a T-75 flask containing selection material (e.g. hygromycin neomycin etc)3) Pellet cells and resuspend at a concentration of 1 x 105 cells/ml in sel ...

蛋白印迹(Western Blot)常用试剂蛋白抽提货号品名规格价格备注WB003组织蛋白抽提试剂100ml300全蛋白抽提WB004RIPA裂解液100ml100全蛋白抽提WB005细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂100次680　WB006膜蛋白和胞质蛋白抽提试剂100次680　WB007改良Western及IP细胞裂解液100ml320　WB008蛋白酶抑制剂混合物(20X)1ml200　WB0 ...

一、实验目的 观察分析植物细胞有丝分裂中期染色体的长短、臂比和随体等形态特征，学习染色体组型分析的方法。了解和掌握不同物种染色体组型和带型分析的方法和技术，进一步鉴别染色体结构和染色体组。要求至少利用一种方法制备出一个物种的合格的染色体标本，进行组型分析或进行不同的带型，如G-带、C-带等分析。练习显微摄影的操作过程，拍摄和印放显微照片。二、实验条件本实验在遗传学实验室完成。遗传学实验室提供： 1 ...

一、实验目的1、学习克隆工作中最常用的双酶切；2、学习将外源基因与质粒连接方法及操作技术；3、学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的技术；4、了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。5、外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术。6、学习鉴定重组子的方法。二、 实验原理重组子的建立：采用双酶切质粒载体pBR322和pUC18，酶切后产生了互补的粘性末端，在T4 DNA 连接酶的作 ...

Gateway技术提供以下可能： 通过去除冗长的亚克隆步骤节省您的时间同时将您的基因转移到多个表达系统在任何您选择的系统��体外，细菌，酵母，昆虫，或哺乳动物��分析表达一、一种更好的克隆方法Gateway技术能够克隆一个或多个基因进入到任何蛋白表达系统（图1）。这项强大的体外技术大大地简化了基因克隆和亚克隆的步骤，而同时典型的克隆效率高达95%或更高。当基因在目的表达载体之间快速简便的穿梭时 ...

与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析时，与总RNA相比，采用poly(A)+ RNA能获得更为满意的 ...

随着DNA合成技术的发展，特别是自动化合成技术的引入，人们能简便、快速、高效地合成其感兴趣的DNA片段。目前，DNA合成技术已成为分子生物学研究必不可少的手段，并且已在基因工程、临床诊断和治疗、法医学等各个领域中日益发挥重要的作用。 1. DNA合成在基因工程和分子生物学研究中的应用1.1合成基因　　目前有许多基因和蛋白质的核苷酸和氨基酸序列已得到阐明，人们已经可以根据需要合成出具有实际应用和研 ...