DNA基础知识

一、实验目的与原理DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象。DNA的提取是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作。本实验通过植物样品在液氮下研磨以粉碎组织，通过裂解液裂解细胞，有机溶剂反复抽提，使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化DNA。二、材料以方法1、 材料：培养菌体2、 仪器设备：超净工作台，培养箱，摇床，恒温水浴锅，高 ...

一、目的与原理限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶，该类酶是体外剪切基因片段的重要工具。实验主要通过EcoR ⅠHind Ⅲ两种限制性内切酶对λ DNA的单切酶、双切酶及部分酶切的操作，掌握内切酶的实验操作技术。二、材料与试剂1．材料：λDNA2．仪器：离心机，恒温水浴，取液器，电泳仪，电泳槽，紫外观测仪3．试剂EcoRI及缓冲液，HindIII及缓冲液，λDNAT ...

一、目的与原理限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶，该类酶是体外剪切基因片段的重要工具。实验主要通过EcoR ⅠHind Ⅲ两种限制性内切酶对λ DNA的单切酶、双切酶及部分酶切的操作，掌握内切酶的实验操作技术。二、材料与试剂1．材料：λDNA2．仪器：离心机，恒温水浴，取液器，电泳仪，电泳槽，紫外观测仪3．试剂EcoRI及缓冲液，HindIII及缓冲液，λDNAT ...

一、目的与原理DNA酶切片段的联接是两DNA片段相邻的5‘磷酸和3’羟基间可有连接酶催化形成磷酸二酯键，这个连接反应在体外一般都有大肠杆菌DNA连接酶和T4DNA连接酶催化，但是分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。本实验拟通过T4DNA连接酶对酶切片断的连接操作，掌握这一DNA片段的连接技术。二、材料和方法1． 仪器离心机，恒温设备，真空干燥机，取液器2 ...

一、目的与原理DNA酶切片段的联接是两DNA片段相邻的5‘磷酸和3’羟基间可有连接酶催化形成磷酸二酯键，这个连接反应在体外一般都有大肠杆菌DNA连接酶和T4DNA连接酶催化，但是分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。本实验拟通过T4DNA连接酶对酶切片断的连接操作，掌握这一DNA片段的连接技术。二、材料和方法1． 仪器离心机，恒温设备，真空干燥机，取液器2 ...

一、目的与原理当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时，即为感受态，而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。二、材料和方法1． 材料：大肠杆菌2． 仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜3． 试剂LB培养基，0.1M MgCl2，3mM氯化六氮合高钴TFB：10Mm MES（pH6. ...

一、目的与原理当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时，即为感受态，而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。二、材料和方法1． 材料：大肠杆菌2． 仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜3． 试剂LB培养基，0.1M MgCl2，3mM氯化六氮合高钴TFB：10Mm MES（pH6. ...

一、目的与原理转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。二、材料和方法1.材料：大肠杆菌2.仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜3.试剂LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ; TFB：10mM M ...

一、目的与原理转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。二、材料和方法1.材料：大肠杆菌2.仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜3.试剂LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ; TFB：10mM M ...

Simple and Efficient Method (SEM) to Make Competent Cells Preparation of Frozen Competent of DH5α 1) 250 ml TB solution 10mM Pipes or 10 mM Hepes 0.65g 15 mM CaCl2 0.55g 250 mM KCl 4.66g *55 mM MnCl2 ...

Simple and Efficient Method (SEM) to Make Competent Cells Preparation of Frozen Competent of DH5α 1) 250 ml TB solution 10mM Pipes or 10 mM Hepes 0.65g 15 mM CaCl2 0.55g 250 mM KCl 4.66g *55 mM MnCl2 ...

Growth and storage of Agrobacterium tumefaciensStrain GV3101: resistant to gentamycin and rifampicin so add 25-50 ug/ml Gentamycin 10 ug/ ml rifampicin on plates or in liquid media for selection. GV31 ...

TSS方法制备感受态细菌（又称一步法）一、准备工作1、缓冲液1×TSS的配制：事先配制1M的氯化镁――20.3g氯化镁(6分子水结晶)/定容于100ml去离子水后封装，不用灭菌。取干净的100ml 量筒和100ml 烧杯，用量筒量取100ml去离子水，加入至烧杯中，取 1 g 蛋白胨，0.5g 酵母抽提物，0.5g 氯化钠，10 g PEG(MW= 3350) 5ml DMSO，5ml 的 ...

Growth and storage of Agrobacterium tumefaciensStrain GV3101: resistant to gentamycin and rifampicin so add 25-50 ug/ml Gentamycin 10 ug/ ml rifampicin on plates or in liquid media for selection. GV31 ...

TSS方法制备感受态细菌（又称一步法）一、准备工作1、缓冲液1×TSS的配制：事先配制1M的氯化镁――20.3g氯化镁(6分子水结晶)/定容于100ml去离子水后封装，不用灭菌。取干净的100ml 量筒和100ml 烧杯，用量筒量取100ml去离子水，加入至烧杯中，取 1 g 蛋白胨，0.5g 酵母抽提物，0.5g 氯化钠，10 g PEG(MW= 3350) 5ml DMSO，5ml 的 ...

我用了快4个月这个试剂盒了，下面是一些总结出来的经验，我现在诱变每次都很成功了，呵呵：）1. 我溶NaOH的水PH值大概在6.5左右，所以我每次调Reagent I的时候3MNaO0H基本都要加150uL左右。2. 解链时用50度水浴15分钟。3. 加入Reagent I后，50度水浴16小时。4. 加入Reagent II和III后，室温孵育10分钟5. 第一次离心用9000 rpm 5分钟。6 ...

我用了快4个月这个试剂盒了，下面是一些总结出来的经验，我现在诱变每次都很成功了，呵呵：）1. 我溶NaOH的水PH值大概在6.5左右，所以我每次调Reagent I的时候3MNaO0H基本都要加150uL左右。2. 解链时用50度水浴15分钟。3. 加入Reagent I后，50度水浴16小时。4. 加入Reagent II和III后，室温孵育10分钟5. 第一次离心用9000 rpm 5分钟。6 ...

BioGene-ExpuzeTMDNA 10分钟快速提取试剂盒中文说明书从全血样本提取DNA的操作规程1、在离心管中加入900 µl的溶液 1及250-300 µl的全血，振荡30秒。2、离心（9000 rpm，1分钟），倒掉上清液。3、先至少振荡30秒，以打破Pellet。4、加入400 µl 溶液2，振荡20秒使Pellet完全溶解（在光线下溶液应清亮透明） ...

1)取30ml蓝藻溶液于10000rpm离心15分钟，将沉淀小心转至1.5mlEppendorf管中；2)用1 mlTE(PH8.0)洗沉淀，12000rpm离心10分钟，弃上清；加240μL BufferA和60μL的5M NaCl每管加Sarkosyl(原浓度是10％)至终浓度为0.1%。3)于4℃保温1小时；12000rpm离心2分钟，取沉淀。以500μL溶液（由49.99ml Buffer ...

1)取30ml蓝藻溶液于10000rpm离心15分钟，将沉淀小心转至1.5mlEppendorf管中；2)用1 mlTE(PH8.0)洗沉淀，12000rpm离心10分钟，弃上清；加240μL BufferA和60μL的5M NaCl每管加Sarkosyl(原浓度是10％)至终浓度为0.1%。3)于4℃保温1小时；12000rpm离心2分钟，取沉淀。以500μL溶液（由49.99ml Buffer ...