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        染色体的提取方法

        互联网

        2070

        1)取30ml蓝藻溶液于10000rpm离心15分钟,将沉淀小心转至1.5mlEppendorf管中;
        2)用1 mlTE(PH8.0)洗沉淀,12000rpm离心10分钟,弃上清;加240μL BufferA和60μL的5M NaCl,每管加Sarkosyl(原浓度是10%)至终浓度为0.1%。
        3)于4℃保温1小时;12000rpm离心2分钟,取沉淀。以500μL溶液(由49.99ml BufferA和10μL 1mM Nacl组成)洗2次,重悬细胞于250μL溶液(BufferA+25%蔗糖),室温放置1小时;
        5)加50mg/ml溶菌酶至其终浓度为10~20mg/ml。于30℃放置15~30分钟;加500μL BufferB(由10mMTriscl和50mM Na2EDTA组成),37℃,放置30分钟;
        6)加10%的SDS至终浓度为1%,小心混匀,37℃放置1小时;
        7)加20mg/ml的蛋白酶K至终浓度为100μL/ml.于37℃保温2小时;
        8)用苯酚+氯仿(1:1)抽提1次,再用氯仿抽提1次;加等体积的异丙醇,可观察到有絮状沉淀;
        9)12000rpm离心10分钟,用70%乙醇洗沉淀,12000rpm离心2分钟,弃上清,挥干沉淀,沉淀溶于10~50μL TE(PH8.0)中;
        10)用0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测染色体提取情况。

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