DNA基础知识

buding2008 最近做实验，想要个假基因，请问各位有没有做过它可以在什么 组织或者细胞上表达。大家畅所欲言，假基因到底表不表达，到底有没有功能。yuandong 有些有功能。waterbeijing 可能有功能，记得以前看过一篇文章说假基因的RNA跟可以编码的mRNA竞争miRNA本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

chenlimei518 请教各位老师们：本人今天上午9：00做慢病毒转染肠癌贴壁细胞（SW620、HCT116），结果今晚6：00去换液观察一下细胞，其中有几个孔细胞死了很多，仅在孔边缘存活几个，有些孔细胞比较多。请老师们帮忙指导。谢谢！具体步骤如下：慢病毒包装：一、1D接293T细胞于6孔板中，undefined10 6/孔二、2D采用3质粒系统包装，12小时换液（1640+10%FBS）三、36小时收病毒，用0.22mm过滤，备用转染SW6 ...

chenguooo 各位大侠，小弟马上要做慢病毒尾静脉注射，想转染肝脏血管内皮细胞，想知道一只BALB/C小鼠要注射多少量？转染效率有多少？查不到类似的文献参考体内肝脏血管内皮好转吗？我的慢病毒滴度是undefined108TU/ML，来自上海英为信公司。谢谢！zhujoker 慢病毒滴度是undefined108TU/ML 打活体滴度太低，效果可能不会好chenguooo 我准备一只打300ul，那么一只就是1.undefined108TU，滴度再高的话，公司说滴度再高的 ...

shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图:现有两个问题想请教各位高人（1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？（2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该如何进行改造？烦请各位不吝赐 ...

443201299 吉玛的shRNA质粒怎么样??吉玛的shRNA质粒最便宜，但不知道它的质量如何，有谁用过吗？感觉质量怎么样？西厢蔷薇 买过几次，一般吧。443201299 下调效率怎么样？？shylook 还是不错的443201299 吉玛的shRNA质粒载体好像是最便宜的！西厢蔷薇 我那个基因本来就是抗外源基因的，所以下调的比较差，买了两次，有一个下调了25%左右华因康基因公司 吉玛的东西一般吧epdn 广州锐博的也不贵噢。akachan ...

wj1989113 最近一直在做慢病毒载体，用的是第二代的三质粒系统，目的片段是一个肝细胞的转录因子。载体构建好之后，包装了一批病毒。然后拿慢病毒感染肝癌细胞株3B和Huh7细胞，想通过PCR和Western验证病毒的表达情况。出现了一些问题：1、每次拿慢病毒感染肝癌细胞株，荧光都很亮，但是做PCR或者Western之后，加对照病毒GFP组的细胞和目的病毒无差异。（条带都较亮）尤其是Western，几乎没有差异。2、感 ...

dlh110 我构建了个microRNA的带GFP标签的质粒，不知道能不能与目的基因的3’UTR luciferase报告载体共转来检测luciferase的活性？bigbang_0_0 这个实验还要谨慎考虑一下，GFP的绿色荧光可能会干扰luciferase检测结果。另外你说的microRNA带GFP标签，你要保证两个东西都要有表达且保持活性，建议你最好把这两个东西构建成两个转录单位，由两个启动子分别起始两个东西的转 ...

lilyfisher 红色的是复制出的DNA，那么在后随链中的复制是不连续的，如“最后一个冈崎片段”所示，我想请教一下，是不是书上写错了，应该是5/呢，谢谢。slytjiaofei 书没有错，随从链最后复制完的是3’端，对于新合成的子链而言最后合成出的是5’端。lilyfisher 非常感谢您的帮助。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiong ...

douermm 最近需要扩增质粒，RNAi用的。接大肠杆菌种用的LB培养基，看有的文章上写的配成PH=7.0的，有的写配成PH=7.5的，到底应该配成多少呢？还有，用买的比如麦康凯培养基，会不会比自己配的效果好？谢谢~！slytjiaofei ph7或7.5对大肠杆菌生长基本没有任何影响。douermm 谢谢楼上~本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：sh ...

lf2003128245 本人手上有个慢病毒的质粒，目的基因是通过SalI酶切位点插入的，我想将这个基因切下来重新构建，希望有经验的大侠能够指点，可以选择些什么样的质粒呀，最好是带有GFP标记的非病毒质粒，还有个问题请教就是，病毒载体是不是不需要类似于G418筛选的标记呀？如果我找到个质粒，将这个基因连上去之后，怎么才能鉴别/筛选目的基因正反向的问题？谢谢了！fjxie 目的基因是通过SalI酶切位点插入的，我想将这个 ...

2012hunanjob 在xbaI酶切位点上：T^CTAGA碱基对应的是AGATC^T，因为质粒是双链，所以在质粒的xbaI酶切位点上中间肯定有GATC，所以说：我觉得理论上只要是dam+细菌提出来的质粒，xbaI酶切位点都受甲基化影响而切不开.但是我见过别人也是用dam+菌扩增过质粒，用xbaI也可以切开它的酶切位点~~~所以我就迷糊了，请各位大侠们多多指点，小弟在此感激不尽了~~~2012hunanjob 顶，有没有人 ...

2012hunanjob 在xbaI酶切位点上：T^CTAGA碱基对应的是AGATC^T，因为质粒是双链，所以在质粒的xbaI酶切位点上中间肯定有GATC，所以说：我觉得理论上只要是dam+细菌提出来的质粒，xbaI酶切位点都受甲基化影响而切不开.但是我见过别人也是用dam+菌扩增过质粒，用xbaI也可以切开它的酶切位点~~~所以我就迷糊了，请各位大侠们多多指点，小弟在此感激不尽了~~~2012hunanjob 顶，有没有人 ...

viola2010 您好，我是新手，pten (loxp/loxp)中loxp是什么意思？Fsp-cre中cre什么意思啊？谢谢woxingwosu 是基因敲除的一种手段。基本原理可见http://www.bio.davidson.edu/courses/genomics/method/CreLoxP.htmlviola2010 谢谢版主本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好 ...

zxmgugl 最近在查某个基因的启动子区CpG岛，发现一个问题：在一个CpG finder的软件上，如果输入的是这个基因第一个外显子第一个碱基的上游序列，能反馈出一段CpG岛（虽然长度只有50多bp，这点也很奇怪，因为这个在线软件的CpG岛界定标准就是长度大于200bp）；如果输入的是这个基因第一个外显子序列内第一个出现的ATG序列的上游序列的话，软件又分析出一段除了前面那个CpG岛，一段更长的CpG岛。所以，就有 ...

liuhp2158 如题，阅读文献碰到illustrator gene，不得其解，请教，谢谢各位XDJM！woxingwosu 请提供一下上下文来参考一下~~liuhp2158 ....This relatively simple perturbation of the DNA methylation systemnot only mimicked the dietary effect of royal jelly on phenotypebut also changed the cytosine methyla ...

viola2010 您好，请问mice bearing a β-catenin-responsive lacZ reporter gene 是什么意思？如何构建？zhujoker 就是老鼠带有β-catenin反应的一个lacZ报告基因，检测β-catenin的变化viola2010 谢谢版主本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

bobbymm 我在做hBrf1这个基因，目前是要构建4个质粒。步骤：1、PCR引物设计，加酶切位点，扩增产物2982+56bp，跑胶鉴定。2、PCR产物跑胶，回收，phenol,chloroform,NaAc+Ethanol提纯。老板说如果测浓度太浪费sample3、双酶切，体系100ul,两个酶分别为2ul。双酶切之后提纯。（已经双酶切PGL3-basic，酶切过的在LB平板上长出3个克隆，没有酶切过的载体则是一片一片的 ...

winniw214 小提的质粒（自己配的S1、S2和S3，不是试剂盒，但是师姐用过没问题的）结果质粒浓度很低。菌液是37度，250rpm摇了11h的，应该够浓。想问一下有没有什么改进的方法？另外，关于加过S1、S2和S3之后的操作（剧烈混匀、颠倒……），我查过问过有好多不同的说法。不知道亲们平时怎么做的，哪种效果比较好？谢谢qijilaile s1,s2,s3混匀后，上下颠倒几次，不宜太剧烈hualala321 手法是最重要的，溶液1 ...

吴彬彬 请问基因的结构性表达和功能性表达的具体定义分别是什么？？求解答，谢谢！zhujoker 不知道你的这种名称从何得来，为什么需要一个具体的定义？为什么非要追求一个死死的地定义，而不理解其具体作用hongyang8318 你说的基因结构性表达可能是你翻译错了，应该说是基因的组成性表达（constitutive gene 或者constitutively expressed）。具体定义指：一类在任何情况下不经诱导均在细胞中有所表达 ...

寒凉 我最近要做E-cadherin DNA质粒转染HK-2细胞，想请教高手们在哪可以买到相关的质粒和使用何种转染试剂较好，谢谢！zhujoker 转染效率主要取决于你的细胞，转染试剂只是一个次要的方面，如果你的时间来得及，最好建议你使用慢病毒载体进行过表达，这样花的时间不是很多，效果肯定比转染好，至于质粒很多公司都有卖的。寒凉 谢谢您的指导本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以 ...