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测序技术及DNA序列测定结果分析

实验试剂 (1)SILVER SEQUENCETM DNA测序试剂盒。(2)丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺储备液(38%丙烯酰胺 W/V,2%甲叉双丙烯酰胺 W/V):95g丙烯酰胺,5g甲叉双丙烯酰胺溶于140ml 双蒸水中,定容至250ml,0.45mm过滤器过滤后,贮于棕色瓶中,置于4℃冰箱可保存2周。(3)10%过硫酸铵,0.5g过硫酸铵溶于4ml水中,定容至5ml,应新配新用。(4)10×T ...

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Isolation of Genomic DNA from Milk using the Tissue DNA Kit (pdf, 126.00 KB)

实验步骤 1. Isolate DNA from leukocyte in Milk: (up to 50ml milk can be used) 1) If the Milk has been stored at 2-8 EC a fatty layer of cream should form. Remove the fatty layer of cream from the top ...

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Cloning of Taq polymerase-amplified PCR products

实验原理 The plasmid vector (pCR®II-TOPO® or pCR®2.1-TOPO®) is supplied linearized with:Single 3´-thymidine (T) overhangs for TA Cloning®Topoisomerase I covalently bound to the vector (referred to as "ac ...

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细菌抗利福平紫外诱变实验

实验原理 微生物育种的目的就是要人为地使某些代谢产物过量积累把生物合成的代谢途径朝人们所希望的方向加以引导或者促使细胞内发生基因的重新组合优化遗传性状获得所需要的高产、优质和低耗的菌种。诱变和筛选则是微生物育种的两个主要环节。育种可分为自发性突变育种和诱发突变育种。但是自发突变的频率很低,一般在 10 -6 ~10 -10 ,而诱变育种频率较高。诱变育种就是利用物理和化学诱变剂处理均匀分散的微 ...

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E 玫瑰花环形成试验的原理及方法

实验原理 正常人外周血中T 细胞在体外能直接和绵羊红细胞(SRBC)结合形成玫瑰花样细胞团。这是因为人的T 细胞膜上具有能和SRBC 膜上的糖蛋白相结合的受体,称为E 受体。已证实E 受体是人T 细胞所特有的表面标志,因此本试验可作为人外周血T 细胞的鉴定和计数,同时作为人细胞免疫功能状态的一个检测指标,也是分离T 细胞的常用方法之一。 实验试剂 1. 淋巴细胞分层液2ml2. 0.5 ...

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DIG (Digoxigenin) labeled RNA probe In situ hybridization protocol

实验步骤 1.DeparaffinizationIf using formaldehyde fixed paraffin embedded sections. For frozen sections please start at section 2Before proceeding with the staining protocol the slides must be deparaff ...

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免疫铁蛋白技术

实验试剂 1. 马脾铁蛋白2. 硫酸铵3. 硫酸镉4. 双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante XC)以0.30Mol/L pH9.5硼酸盐缓冲液将XC配制成1%溶液。注意配制的水及容器必须特别清洁,配制后放置4℃数天,以不出现沉淀为准。如出现沉淀XC的多聚体形成,应重配。5. 0.30Mol/L pH9.5硼盐酸缓冲液6. 0.1Mol/L硫酸铵液 7. 0.05Mol ...

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蔬菜中有机磷农残快速检验法——快速卡法

实验原理 胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂(红色)水解为乙酸与靛酚(蓝色),有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用,使催化、水解、变色的过程发生改变,由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。 实验试剂 1. 固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片;2. pH 7.5 磷酸盐缓冲液:分别称取15.0g磷酸氢二钠HPO4•12H2O与1.59g无水磷酸二氢钾PO4 ...

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酸性α醋酸萘酯酶染色法

实验原理 淋巴细胞内含有许多种酶,如α醋酸萘酯酶(ANAE)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、β葡萄糖苷酸酶等。不同的淋巴细胞细胞亚群所含酶类及其含量各异,如淋巴母细胞富含ACP,而成熟的T淋巴细胞则显示ANAE活性,因此可利用化学反应作检测。T淋巴细胞浆内含有的酸性α醋酸萘酯酶(acid αnaphthyl acetate estera ...

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质谱分析

实验步骤 1. 胶内酶切随机选择重复性好,差异显著,无明显变形、拖尾,与周围蛋白点分离明确的蛋白点作为质谱分析对象,进行胶内酶解。 1) 从胶上切取蛋白质凝胶颗粒置入96孔培养板内,用去离子水清洗数次。 2) 加50 ul脱色液在室温下震荡至凝胶中棕黄色褪尽,弃去溶液; 3) 去离子水洗涤,重复2次; 4) 在室温下震荡10分钟脱水,吸弃其中的ACN,重复2次; 5 ...

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Stool DNA Protocol (for pathogen detection)

实验试剂 1. Equilibrate sterile dH2O or 10 mM Tris pH 8.5 at 65°C.2. Absolute (96%-100%) ethanol3. RNase A stock solution at 20 mg/mL 4. Isopropanol (100%) 实验设备 1. Microcentrifuge capable of at leas ...

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"Glassing Out" DNA Using the Geneclean Kit

实验步骤 If you are purifying DNA that is already in aqueous solution then proceed directly to step 3. If the DNA is being gel purified then begin with step 1.1.Excise DNA band from ethidium bromide-sta ...

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昆虫体内酵母类共生菌的形态观察

实验试剂 1. 样品包埋剂选用Leica CM1900 冷冻切片机配套包埋剂(OCT-compound) 2. 结晶紫,组织染色选用常规染色剂3. 二甲苯(进行组织切片的脱水和透明处理) 4. 香柏油(油镜观察用) 实验设备 1. Leica CM1900 冷冻切片机(Leica Microsystems Nussloch GmbH, German) 切片厚度范围为0~50μm ...

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Fastfilter Plasmid Maxi Kit Spin Protocol

实验步骤 Growth of bacterial culture:1. Culture volume: Inoculate 200 ml LB/ampicillin (50 ug/ml) medium placed in a 1-4 liter culture flask with E.coli carrying desired plasmid and grow at 37°C with agi ...

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酵母DNA微量制备

实验步骤 1. 酵母DNA微量制备(40ml) 1) 在125ml三角瓶中用40ml YPD培养液在30℃条件下培养细胞达最大生长量(过夜)。 2) 将上述培养物移入螺盖离心管,用医用离心机或Sorvall SS-34转头以5000r/min离心5分钟,弃去上清液。 3) 将细胞悬浮在3ml的0.9mol/L山梨醇-0.1mol/L Na2EDTA(pH7.5)溶液中。 ...

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Real Time PCR

实验步骤 1.First Step: Find your DNA concentrations. The first person to nanodrop needs to get some water TE and a 2 ul pipette tips and your DNA samples completely mixed. If you had a large pellet you ...

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电穿孔和电融合技术

实验原理 当细胞置于非常高的电场中,细胞膜就变得具有通透性,能让外界的分子扩散进细胞内,这一现象称为电穿孔。运用这一技术,许多物质,包括DNA、 RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法,电穿孔已被广泛用于各种细胞类型,包括细菌、酵母、植物和动物细胞;而且,它还能作为注射方法(称为电注射),把各种外源物质引入活细胞。与其他常用的导入外源物质的方法相比,电穿孔具有很多 ...

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E.Z.N.A.® HP Total RNA Kit Spin Protocol Eukaryotic Cells and Tissues

实验原理 The E.Z.N.A.® HP Total RNA Kit uses the reversible binding properties of HiBind® matrix a new silica-based material. This is combined with the speed of mini-column spin technology. A specificall ...

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E.Z.N.A.TM Fast Protocol For FFPE Tissue

实验原理 E.Z.N.A.TM FFPE RNA Kit uses the reversible binding properties of HiBind® matrix a new silica-based material combined with the speed of mini-column spin technology. A specifically formulated buf ...

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RNA Isolation from Arthropods

实验试剂 1. 2-mercaptoethanol2. Absolute (96%-100%) ethanol 3. Liquid nitrogen for freezing/disrupting samples 实验设备 1. Microcentrifuge capable of 10000 x g2. Nuclease-free microfuge tubes 3. Preheat ...

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