噬菌体

我欲先构建某一个病毒的cDNA文库（construction of the cDNA phage-display library ），再用噬菌体展示技术来筛与某一受体蛋白对应的病毒表面的配体蛋白。 我想问的是： 1、我应该选择哪种噬菌体作为载体（优点？） 2、文库的构建至关重要，有没有好的专门先用来构建cDNA文库，再做噬菌体展示的试剂盒（厂家、价格？） 3、有没有相关的书、文献推荐 4、该技术的 ...

噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。到目前为止，人们已开发出了单链丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统等数种噬菌体展示系统。本文主要概述了噬菌体展示技术的基本原理、噬菌体展示系统研究以及技术特点等，并跟踪了目前该领域的最新研 ...

从海水中如何分离一种噬菌体？这是一道以前的研究生考题希望大家help me！ I hope this could solve your problem：Marine phage genomics-review.pdf (345.3k) ...

请教有关噬菌体分离扩增测滴度纯化等的相关问题，首先是如何从污水或标本中获取，可能这些问题比较傻，但是本人是新手，敬请指教，不要取笑！谢谢！ 下面这篇文章是讲如何从污水中分离噬菌体的，肯定会对你有帮助http://highered.mcgraw-hill.com/sites/dl/free/0072487445/92720/Exercise37.pdf 我们实验室的噬菌体扩增及测滴度方法： 第一 ...

碘化物缓冲液： 10 mM Tris-HCl (pH 8.0) 1 mM EDTA 4 M NaCl。室温避光贮存。不知道这里面哪个是需要避光的？我怎么没有提出DNA来，不知道是为什么？用的是NEB手册上写的方法。 1. 按上述方法进行噬菌斑扩增，在第一步离心后，将500 µl含噬菌体上清转入一新鲜离心管。 2. 加200 µl PEG/NaCl，颠倒混匀，室温放置10 ...

我们实验室的噬菌体想冷冻干燥保存，冷冻干燥机都买好了，但是没有规范的操作流程及注意事项，不知道哪位专家可以提供一份详细的资料？非常感谢！ 我公司开展做平板培养基生产后，平板里水汽很大，却没有好的解决方案，不知道哪位专家可以提供一些这方面的资料？非常感谢！ 在倒平板前的培养基应在三角瓶中灭菌等降温至40-50度时再在无菌操作下倒入平板内这样平板内的水份就不会太多了. 冷冻干燥保藏法 （1）准备安瓿管 ...

看说明书上是写着用ＣsＣl梯度离心的方式，除此外还有别的吗？最好是所涉及的器材可方便取得的。还有啊，像M13之类的噬菌体可以用PEG/NaCl方法得到其DNA，这个T7就不适合了？多谢各位支持。 相关的例子: 1.取活鲤鱼肝胰脏经冲洗后立即投入液氮中.然后制成匀浆.先在4℃下600g离心保留上层液.再900g离心保留沉淀物并用不同溶液重复悬浮洗涤离心可得到比较纯的线粒体.将上述线粒体在含1% ...

我根据分子克隆上的经典方法提取M13噬菌体单链DNA，第一次就成功。但是随后几次，试剂和方法都一样，在可以看见噬菌体白色沉淀的基础上（量足够多），却怎么也提不出来，最后乙醇沉淀时，一片空白。请求各位大侠指点迷津。谢谢 既然首先可以成功，说明方法肯定没问题。建议： 1、检查你的试剂有无污染； 2、操作有无问题（虽然可能性小，但有时很难想到的）； 3、也可以换用其他方法，做个对照。 ...

宿主不一样，你要分离的噬菌体方法步骤也不一样，下面摘录部分菌株对应的噬菌体分离过程步骤，仅供参考： 1、噬菌体分离　 (1) 以新鲜鸽粪4g 加入100ml 普通液体培养基内放入37 ℃温箱培养24h。 (2) 次日从中取出10ml70 ℃加热30min 离心2000r/ 10min 上清液用滤器过滤后保存于4 ℃冰箱备用。 (3) 在普通琼脂平板底面分别注明1、2、3 号。 (4)在1 号平板接 ...

pfu指的是噬菌体的空斑形成单位。以下是关于测定M13效价的一个方法： 测定噬菌体滴度 只有当噬菌体的感染复度MOI (multiplicity of infection)值远低于1时（即细胞过量时），噬菌斑的数量才会随着加入噬菌体的量而呈线性增加。正因如此，建议检测噬菌体贮液的滴度时，在感染前进行稀释，而不是在高MOI值的情况下稀释被感染的细胞。低MOI值有助于确保每个噬菌斑仅含一个DNA序 ...

MOI 是multiplicity of infection的缩写，中文译为感染复数。传统的MOI概念起源于噬菌体感染细菌的研究。其含义是感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。噬菌体的数量单位为pfu。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。后来MOI被普遍用于病毒感染细胞的研究中，含义是感染时病毒与细胞数量的比值。 然 ...

确定抗原表位，包括表位的序列和构象，是免疫学家感兴趣的一个问题。表位的确定不仅可以了解有关免疫反应的众多信息，为进一步人工控制免疫反应奠定基础，而且对药物合成、疫苗设计等也具有指导意义。确定表位常用的方法有：还原法、蛋白印迹法、肽扫描、突变分析等，后两种方法还同时解决了蛋白分子一级序列问题。但这些方法大多困难而繁琐。 近几年来，噬菌体展示技术成为探测蛋白空间结构、探索受体与配体之间相互作用结合位点 ...

有实验者提问：筛选的噬菌体扩增后滴度没有增加 一丁香园网友建议： 你筛选的噬菌体必须保证有完整的系列； 你的扩增条件必须控制好如酶的用量;温度;PH及时间等； 如果能排除以上条件再思考一下检测滴度有没有问题. 另一丁香园网友观点： 关键是酶的质量; 用过好几种酶，国产的如天为时代、生工的不太行，建议用MBI的试一下。 ...

停产，用次氯酸钠将房间整个清洁消毒，所有器具高温灭菌或用次氯酸钠浸泡。 地面用量：有效氯浓度2500ppm，大于30min； 器具：有效氯浓度500ppm，20min。摇床用甲醛加高锰酸钾熏蒸，用前再用紫外照射半小时。 发酵罐高温灭菌。 如果空气中噬菌体浓度也较高的话，可以用甲醛熏蒸，3g/平米；或用紫外照射，但要注意，因为这两种方法都可能对仪器造成腐蚀。下水也要用次氯酸钠处理。空气中噬菌体的检测 ...

1 样品采集 将一定的样品放入灭菌三角瓶中，加入对数生长期的敏感指示菌如大肠杆菌菌液3～5mL，再加20mL二倍肉汤蛋白胨培养液。 2 增殖培养 30℃振荡培养12～18h 使噬菌体增殖。 3 离心分离 将上述培养液以3000rpm离心15～20min 取上清液，用pH7.0，1%蛋白胨水稀释至10-2～10-3，用于噬菌体检查及效价测定。 4 生物测定法 4.1双层琼脂平板法 4.1.1 倒下层 ...

噬菌体： M13KE T7 宿主细胞 ： ER2738 BL21/BLT5403/BLT5615 噬菌体释放方式： M13噬菌体溶源性，不裂解宿主菌。极大地简化了每轮淘选过程中的噬菌体纯化步骤，只用简单的PEG沉淀方法即可。 T7是裂解性的，其展示的蛋白不需分泌。这一优点使更多的序列可能被展 ...

第一天： 17：00：后用接种环取一单克隆细菌接种于LB培养液中，37°C摇床过夜（不要超过16小时） 第二天： 7：30：打开紫外灯，照射半小时（将器械放入通风橱中） 8：00：将20mL的LB培养液放入250mL的三角烧瓶中，按1：100的比例稀释过夜培养的细菌（即放入200ul 的细菌液体），将其放入37°C摇床，培养约3.5个小时 11：00：打开紫外灯，照射半小时 11： ...

部分菌株对应的噬菌体分离过程步骤：1、噬菌体分离　(1) 以新鲜鸽粪4g 加入100ml 普通液体培养基内放入37 ℃温箱培养24h。(2) 次日从中取出10ml70 ℃加热30min 离心2000r/ 10min 上清液用滤器过滤后保存于4 ℃冰箱备用。(3) 在普通琼脂平板底面分别注明1、2、3 号。(4)在1 号平板接种事先培养好的6h 幼龄菌乙型副伤寒杆菌一接种环;2 号平板接种幼龄菌福氏 ...