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        M13噬菌体单链DNA提取

        互联网

        4678

        我根据分子克隆上的经典方法提取M13噬菌体单链DNA,第一次就成功。但是随后几次,试剂和方法都一样,在可以看见噬菌体白色沉淀的基础上(量足够多),却怎么也提不出来,最后乙醇沉淀时,一片空白。请求各位大侠指点迷津。谢谢 !

         既然首先可以成功,说明方法肯定没问题。建议: 
              1、检查你的试剂有无污染; 
              2、操作有无问题(虽然可能性小,但有时很难想到的);
              3、也可以换用其他方法,做个对照。

        推荐一个快速的用NaI法噬菌体DNA提取的方法,是NEB公司噬菌体展示试剂盒说明书中列的PROTOCOL,我试过,效果还不错。

               取500ul含有噬菌体的上清液
                                 ↓
              加入200ul PEG/NaCl,充分混合,室温静置10min 
                                 ↓
              4℃ 10000rpm离心10min,去上清
                                 ↓
              重新离心,尽量吸去剩余的上清液
                                 ↓
              加入100 ul Iodide Buffer彻底溶解沉淀,再加入250ul乙醇,室温孵育10min,大部分噬菌体蛋白存在于溶液中,沉淀单链噬菌体DNA 
                                 ↓
              4℃ 10000rpm离心10min,去上清,加入70%乙醇洗沉淀,真空干燥
                                 ↓
              加入30 ul TE Buffer溶解沉淀,即为噬菌体DNA溶液 

        Iodide Buffer: 
              Tris-HCl(pH8.0) 10mM
              EDTA 1mM
              NaI 4M
              室温避光保存。

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