碘化物缓冲液提取噬菌体单链DNA

碘化物缓冲液： 10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA, 4 M NaCl。室温避光贮存。不知道这里面哪个是需要避光的？我怎么没有提出DNA来，不知道是为什么？用的是NEB手册上写的方法。

1. 按上述方法进行噬菌斑扩增，在第一步离心后，将500 µl含噬菌体上清转入一新鲜离心管。

2. 加200 µl PEG/NaCl，颠倒混匀，室温放置10 min。

3. 离心10 min，弃上清液。

4. 短暂离心，小心吸去残余上清。

5. 沉淀物彻底重悬于100 µl碘化物缓冲液中，加入250 µl乙醇。室温温育10 min。短时间的室温温育使单链噬菌体DNA沉淀而大多数噬菌体蛋白保持在溶液中。

6. 离心10 min，弃上清。用70%的乙醇洗沉淀，短暂真空干燥。

7. 沉淀重悬于30 µl TE [10 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM EDTA]中。

8. 5 µl的上述模板溶液足够进行35S或33P标记的手工双脱氧测序, 或染料标记的自动循环双脱氧测序。根据测序方法的不同, 适当增减模板用量。

但是我一加入乙醇后就会出现很明显的大量白色沉淀，不知是为什么？好像是蛋白沉淀。

在用碘化物溶液提取噬菌体单链DNA过程中需要注意以下事项：

1.噬菌体上清是经过两次离心，并吸取上层80%液体得到，去除菌体。

2.操作过程在室温进行

3.沉淀要用NaI溶液彻底吹打

4.与碘化物温育时间不能超过10分钟

5.离心时间准确，不能太长

大量白色沉淀就是蛋白，主要是操作过程中不正确导致的噬菌体蛋白沉淀。

酚：仿提取核酸的方法不失为一种有效的方法，可以偿试用一下。