实验基础

实验四十 大分子物质的水解试验 　　一、目的要求 　　证明不同的微生物对复杂有机大分子的水解能力不同，从而说明不同的微生物有不同的酶系统。 　　二、基本原理 　　细菌对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶将大分子物质分解。胞外酶能分泌扩散到细胞外，将物质分解成小单位如糖、氨基酸、甘油与脂肪酸。这些小单位的物质能被 ...

实验四十一 糖发酵试验 　　一、目的要求 　　了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。 　　二、基本原理 　　糖发酵试验是最常用的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖的能力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖并产酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢、甲烷、二氧化碳等）；有些细菌只产酸不产气。例如 ...

实验四十二 IMVIC与硫化氢试验 　　一、目的要求 　　了解IMVIC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义。 　　二、基本原理 　　IMVIC是吲哚试验（indol test）、甲基红试验（methylred test）、伏-普试验（Voges-Prokauer test，V．P．试验） 和柠檬酸盐试验（citrate tes ...

实验四十四 抗生素效价的生物测定 　　一、目的要求 　　学习了解抗生素效价的生物测定（管碟法）的基本原理和方法。 　　二、基本原理 　　某些微生物在代谢过程中所产生的次级代谢产物能在低浓度的情况下抑制或杀死某些微生物，这种物质称为抗生素。 　　抗生素效价的生物测定有稀释法、比浊法、扩散法三大类。管碟法是扩散法中的一种，本法是利用抗生素在琼脂培养基的扩散渗透作 ...

Ⅺ．微生物遗传 　　遗传是生物学中最基本的理论问题。而微生物则是研究遗传学有关基本理论问题的最好对象和实验材料。这是因为微生物的营养体大多数是单倍体，便于作为基因作用和基因精细结构的研究材料；易于培养，在固体培养基上能形成肉眼可见的菌落以作各种性状的分析；繁殖快，容易获得大量的研究材料；代谢力强，易于积累可供分析研究的中间代谢产物；易变异，可以获得各种遗传性标记。因此，研究微生物的遗传变 ...

实验四十六 抗药性突变株的分离 　　一、目的要求 　　学习用梯度培养皿法分离抗药性突变株。 　　二、基本原理 　　微生物的抗药性突变是 DNA分子的某一特定位置的结构改变的结果，与药物的存在无关，某种药物的存在只是作为分离某种抗药性菌株的一种手段。因而在含有一定抑制生长药物浓度的平板上接种大量的细胞群体，在这些细胞群体中只有极个别具有抗性突变的菌株才能在平板 ...

实验四十五 理化因素的诱变效应 　　一、目的要求 　　通过实验，观察紫外线，硫酸二乙酯对枯草芽孢杆菌BF7658的诱变效应，并学习理化因素诱变育种的方法。 　　二、基本原理 　　许多物理因素（如紫外线、X射线，γ射线等）和化学因素（如硫酸二乙酯、氮芥、亚硝酸、乙烯亚胺、亚硝基胍等）对微生物都有诱变作用。能够引起诱变作用的这些理化因素称为诱变剂。诱变剂的作用是 ...

实验四十三 微量简易诊检系统 　　一、目的要求 　　了解微量简易诊检系统的原理及其优越性，学习使用E-15系统的方法。 　　二、基本原理 　　各种不同的脱水试验培养基和指示剂被吸附在滤纸片上或直接加入特殊的分隔室内，构成一微量生化诊检卡，加入某一试验菌液，培养后即能得到反应结果，可用来对试验菌进行诊断与鉴定。 　　国际上广泛使用的有API-20E系统 ...

Ⅻ．病毒 　　病毒是一类个体极小的超显微生物，必须借助电子显微镜才能观察到。病毒没有细胞结构，大多数病毒是蛋白质与核酸组成的大分子，每一种病毒的核酸或是RNA，或是DNA。它们是专性寄生物，不能独立进行代谢活动与繁殖，只能在特异的宿主细胞内进行复制。 　　根据宿主的不同，可将病毒分为动物病毒（包括昆虫病毒）、植物病毒与细菌病毒——噬菌体等。由于病毒是专性寄生物，因此，还不能用人工培 ...

实验四十七 细菌的接合作用 　　一、目的要求 　　1．了解细菌接合作用的基本原理。 　　2．学习细菌接合实验的基本方法。 　　二、基本原理 　　细菌的接合是指供体菌与受体菌的完整细胞经直接接触时，供体菌的 DNA分子（包括质粒）传递给受体菌而产生基因重组的现象。营养缺陷型菌株例如Me-Th 或Me Th-不能在基本培养基中生长，如果将两者混合培养，使其接合 ...

实验四十八 噬菌体的分离与纯化 　　一、目的要求 　　1．学习分离、纯化噬菌体的基本原理和方法。 　　2．观察噬菌斑。 　　二、基本原理 　　因为噬菌体是专性寄生物，所以自然界中凡有细菌分布的地方，均可发现其特异的噬菌体的存在，亦即噬菌体是伴随着宿主细菌的分布而分布的，例如粪便与阴沟污水中含有大量大肠杆菌，故也能很容易地分离到大肠杆菌噬菌体；乳牛场有较多的 ...

实验四十九 噬菌体效价的测定 　　一、目的要求 　　学习噬菌体效价测定的基本方法。 　　二、基本原理 　　噬菌体的效价就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一个噬菌体产生一个噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数。 　　三、器材 　　大肠杆菌18小时培养液，大肠杆菌噬菌体10 ...

ⅩⅢ．免疫学技术 　　免疫分为非特异性免疫和特异性免疫两大类。非特异性免疫是由机体固有的组织细胞和体液中的抗菌物质共同实现的，例如吞噬细胞、补体、溶菌酶等。特异性免疫是由于机体受抗原刺激后所产生的特异性致敏细胞和抗体所起的作用。这些免疫因素及其作用在体外均可测得，例如可将吞噬细胞从人体的血液或动物的血液和腹腔液中分离出来，再加入细菌，可观察到吞噬细胞的吞噬活性，用以说明该机体的吞噬免疫功 ...

实验五十 动物病毒的鸡胚培养法 　　一、目的要求 　　1．了解动物病毒鸡胚培养的意义及用途。 　　2．初步掌握病毒鸡胚培养的基本方法。 　　二、基本原理 　　鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的一种培养方法，此方法可用以进行多种病毒的分离、培养，毒力的滴定，中和试验以及抗原和疫苗的制备等。 　　鸡胚培养的技术比组织培养容易成功，也比接种动物的动 ...

实验五十二 实验动物的注射方法 　　一、目的要求 　　练习对实验动物注射的操作方法。 　　二、基本原理 　　很多微生物学与免疫学实验均需利用动物，例如鼠疫杆菌等病原菌的毒力试验、菌苗与疫苗的安全试验、药物对免疫功能的影响等常在小白鼠体内进行；免疫血清的制备常将抗原注射于家兔体内，然后分离家兔的血清；豚鼠常用于被检材料的细菌分离，如从病人痰液内分离结核菌，其他也用于白喉杆菌 ...

实验五十三 吞噬作用 　　一、目的要求 　　观察动物的白细胞和巨噬细胞对细菌和异物的吞噬现象。 　　二、基本原理 　　人体和动物机体具有吞噬作用的细胞主要有多形核白细胞（小吞噬细胞）和巨噬细胞（大吞噬细胞），它们在机体的免疫反应中起着很重要的作用。本实验就是根据机体的这一基本免疫现象而设计的。 　　三、器材 　　豚鼠，白色葡萄球菌悬液（每毫升含 ...

实验五十四 抗原与免疫血清的制备 　　一、目的要求 　　1．学习抗原与抗体的一种制备方法。 　　2．为“凝集反应”实验准备材料。 　　二、基本原理 　　将抗原注射于动物体，使其产生相应的抗体，待动物血清中产生大量的抗体时，采出动物的血液，分离析出血清，此即含抗体的抗血清或称免疫血清。制备特异性强、效价高的免疫血清对于微生物的鉴定，疾病的诊断与治疗以及抗原的 ...

实验五十五 凝集反应 　　一、目的要求 　　1．了解血清学反应的基本原则。 　　2．学习玻片凝集与试管凝集的操作与观察结果的方法。 　　二、基本原理 　　凝集反应可说是经典的血清学反应，使用历史长并一直沿用至今。它分为玻片凝集法与试管凝集法两种。利用已知抗血清鉴定未知细菌常用玻片凝集法，其突出优点是极端快速，为诊断肠道传染病时鉴定病人标本中肠道细菌的重要手 ...

实验五十六 环状沉淀反应 　　一、目的要求 　　通过沉淀素的效价滴定，学习环状沉淀反应的操作方法及结果的观察。 　　二、基本原理 　　沉淀反应与凝集反应的原理基本相同，所不同的是使用的抗原是可溶性的，正因为是可溶性抗原，其单个抗原分子体积小，在单位体积的溶液内所含抗原量多，其总反应面积大，出现反应所需要的抗体量多，因此，试验时是稀释抗原，而不是稀释抗体。引起沉 ...

实验五十七 双向免疫扩散试验 　　一、目的要求 　　1．练习双向免疫扩散试验的操作方法。 　　2．观察抗原、抗体在琼脂中形成的沉淀线。 　　3．了解双向免疫扩散试验的用途。 　　二、基本原理 　　抗原、抗体在凝胶中扩散，并进行沉淀反应，叫做免疫扩散反应（immunodiffusion）。将抗原与其相应抗体放在凝胶（如琼脂）平板中的邻近孔内，使它们互相扩散 ...