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        环状沉淀反应

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        8001

        实验五十六 环状沉淀反应

          一、目的要求

          通过沉淀素的效价滴定,学习环状沉淀反应的操作方法及结果的观察。

          二、基本原理

          沉淀反应与凝集反应的原理基本相同,所不同的是使用的抗原是可溶性的,正因为是可溶性抗原,其单个抗原分子体积小,在单位体积的溶液内所含抗原量多,其总反应面积大,出现反应所需要的抗体量多,因此,试验时是稀释抗原,而不是稀释抗体。引起沉淀反应的抗原称为沉淀原,相应抗体称为沉淀素。

          环状沉淀反应是使抗原与抗体在沉淀管内形成交界面,然后在此交界面处出现一环状的乳白色沉淀物(图ⅩⅢ-8)。出现此环状反应的抗原最高稀释度即为沉淀素的效价。

          环状沉淀反应广泛应用于法医学的血迹鉴别和食物掺假的测定。通常这些可疑材料作为抗原,用标准抗血清加以鉴定。它具有用材少的优点,例如衣服等物品上的血迹用生理盐水洗下就可作为抗原进行检查。图ⅩⅢ—8 环状沉淀试验A.有沉淀环的阳性管;B.阴性管Ag:抗原;Ab:抗体

          三、器材

          马血清(抗原),兔抗马免疫血清(抗体),正常兔血清,生理盐水;

          沉淀管(内径约2.5—3.0mm,长约30mm),小试管,毛细吸管,吸管等。

          四、操作步骤

          1.取1:25的马血清1ml,用倍比稀释法在小试管中按下表稀释成各种浓度。

          2.将9个干燥而清洁的沉淀管插在试管架的小孔上,使直立。

          3.用毛细吸管吸取1:2的兔抗马免疫血清,加入沉淀管底部,每管约两滴。

          4.用另一毛细吸管吸上面已稀释好的马血清(抗原),按下表加入各管。

          从最高稀释度加起,加入时,沿管壁徐徐加入,使与下层兔抗马免疫血清之间形成界面,切勿摇动,第8管加生理盐水,第9管加稀释兔血清以作对照。

          5.于室温中静置15—30分钟后观察结果,在两液面交界处看有无白色环状沉淀出现。

          6.结果记录的方法是凡有白色环状沉淀者,记“ ”号,没有沉淀者,记“-”号。最大稀释度的抗原与抗体交界面之间还有白色沉淀者,此管的稀释度即为沉淀素的效价。

          五、实验报告

          1.结果

          沉淀素的效价是多少?

          2.思考题

          (1)试比较凝集反应与沉淀反应的异同。

          (2)环状沉淀试验有何特点?

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