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        大分子物质的水解试验

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        实验四十 大分子物质的水解试验

         

          一、目的要求

          证明不同的微生物对复杂有机大分子的水解能力不同,从而说明不同的微生物有不同的酶系统。

          二、基本原理

          细菌对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用,必须靠产生的胞外酶,如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶将大分子物质分解。胞外酶能分泌扩散到细胞外,将物质分解成小单位如糖、氨基酸、甘油与脂肪酸。这些小单位的物质能被细菌吸收和利用。水解过程可通过底物的变化来证明,如细菌水解淀粉的区域,用碘测定不再产生蓝色;水解明胶可观察到明胶被液化;脂肪水解后产生脂肪酸改变培养基的pH,其中的中性红指示剂使培养基从淡红色变为深红色。

          三、器材

          金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,大肠杆菌,绿脓杆菌(Bacte-rium Pyocyaneum)斜面各一支;

          油脂培养基,淀粉培养基,明胶培养基,无菌平皿,接种环和接种针,革兰氏染色用卢戈氏碘液(Lugol's iodine solution)等。

          四、操作步骤

          1.油脂水解试验

          (1)将溶化的油脂培养基冷至45℃左右时,充分振荡,使油脂均匀分布,用无菌操作倒入平皿中,待凝。

          (2)将制成的平板用记号笔划成两半,一半接种金黄色葡萄球菌作为对照,另一半接种枯草芽孢杆菌作为试验菌,均用无菌操作画“ ”接种,如图Ⅹ-1。

          (3)将接种的平板倒置于37℃温室中培养24小时。

          (4)取出平板,观察平板底层长菌的地方,如出现红色斑点,说明脂肪被水解,为阳性反应。

          2.淀粉水解试验

          (1)将淀粉培养基溶化后,冷至45℃左右,以无菌操作制成平板。

          (2)用记号笔将平板划成两半,一半接种大肠杆菌作为试验菌,另一半接种枯草芽孢杆菌作为对照菌,均用无菌操作划线接种,如图Ⅹ-2。

          (3)将上述已接种的平板倒置于37℃温室中培养24小时。

          (4)将已培养24小时的平皿取出,打开皿盖,滴加少量卢戈氏碘液于平板上,轻轻旋转平皿,使碘液均匀铺满整个平板。如菌苔周围出现无色透明圈,说明淀粉已被水解。透明圈的大小、说明该菌水解淀粉能力的强弱。

          3.明胶液化试验

          (1)取三管明胶培养基,用记号笔标明各管接种的菌名。分别以无菌操作用接种针穿刺接种大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、绿脓杆菌。

         

          (2)接种后,置20℃温室中培养2—5天。

          (3)观察明胶培养基液化情况(图Ⅹ-3)。

          五、实验报告

          结果

          将结果填入下表。“ ”表示阳性;“-”表示阴性。

          大分子物质的水解试验

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