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        吞噬作用

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        3875

        实验五十三 吞噬作用

          一、目的要求

          观察动物的白细胞和巨噬细胞对细菌和异物的吞噬现象。

          二、基本原理

          人体和动物机体具有吞噬作用的细胞主要有多形核白细胞(小吞噬细胞)和巨噬细胞(大吞噬细胞),它们在机体的免疫反应中起着很重要的作用。本实验就是根据机体的这一基本免疫现象而设计的。

          三、器材

          豚鼠,白色葡萄球菌悬液(每毫升含6亿个菌),1%鸡红细胞悬液,肝素溶液(每毫升含25单位),可溶性淀粉,甲醇,消毒酒精,碱性美蓝染液,瑞氏(Wright)染液;

          血红蛋白吸管,凹玻片,载玻片,1ml注射器及老编号26号与22号针头,棉球等。

          四、操作步骤

          1.白细胞吞噬试验

          (1)用装有最小针头的 1ml注射器在洁净凹玻片的凹孔内加入0.02ml肝素溶液。

          (2)用酒精棉花消毒耳垂或手指,再用消毒针头刺破消毒处的皮肤,以血红蛋白吸管吸取血液0.04 ml,立即放入以上凹孔内,轻轻搅动混匀。

          (3)再用1ml注射器加入约0.02 ml的白色葡萄球菌悬液,充分混匀。

          (4)将凹玻片放入铺有数层湿纱布的培养皿或有盖搪瓷盘(先放37℃温箱中预温)内,放37℃温箱中作用30分钟,每隔10分钟摇匀一次。

          (5)取一小滴血液与白色葡萄球菌混合液于载玻片上,取另一边缘光滑的玻片用其边缘按图XIII-4推成薄片,待干。

          (6)滴加甲醇固定3分钟,用水冲洗,晾干。

          (7)用碱性美蓝染液染色1—2分钟,水冲洗,晾干。

          (8)油镜下观察。数100个多形核白细胞中有多少个吞噬了细菌的,即为吞噬细胞百分数。

          再数此100个多形核白细胞中一共吞噬了多少细菌,将此总数除以100,得出每个白细胞吞噬细菌的平均数,即为吞噬指数。

          2.巨噬细胞吞噬试验

          (1)取可溶性淀粉少许加入十几毫升水中,煮沸。

          (2)助手用实验五十二的方法抓住豚鼠。

          (3)消毒腹部皮肤,将准备好的淀粉溶液6ml注射于豚鼠腹腔内,隔1小时再注射6ml。

          (4)再隔1小时后,腹腔注射3ml1%鸡红细胞悬液。

          (5)6小时后,用注射器抽取腹腔渗出液,滴少许于载玻片上,推成薄片,待干。

          (6)用瑞氏染液染色1分钟,再加等量的蒸馏水,轻轻混合,经5分钟后,用蒸馏水冲洗,待干。

          (7)油镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞现象,同样计算吞噬细胞百分数和吞噬指数。

          五、实验报告

          1.结果

          (1)绘图表示所观察到的多形核白细胞与巨噬细胞的吞噬现象。

          (2)计算多形核白细胞吞噬作用的吞噬细胞百分数和吞噬指数。

          (3)计算巨噬细胞吞噬作用的吞噬细胞百分数和吞噬指数。

          2.思考题

          (1)吞噬细胞是如何杀死细菌的?

          (2)巨噬细胞的吞噬试验为什么先在动物腹腔内注射淀粉?

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