免疫细胞检测技术

免疫缺陷是一种由于人体的免疫系统发育缺陷或免疫反应障碍致使人体抗感染能力低下，临床表现为反复感染或严重感染性疾病。

免疫学和遗传学交叉的边缘学科，主要研究免疫系统的结构和功能如免疫应答、抗体的多样性等的遗传基础。

A. 直接标记抗体（FITC标记抗体）： (1) 收集1×106个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。 (2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。 (3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5m ...

摘要：目的 建立人外周血 CD34 +细胞及其亚群的纯化分离方法。方法 用干细胞采集仪收集了3例病人的外周血干细胞，应用免疫磁珠分离柱快速分离其中的CD34+细胞，随后采用分选型 EPICS Elite 流式细胞仪进一步分选出CD34 +/ CD90 +双阳性早期造血干细胞。结果 免疫磁珠分离纯化后CD34 +干细胞的纯度可达83%～95%，回收率54%～71%，活细胞率 ...

流式细胞仪(flow cytometer，FCM)是进行流式细胞分析的仪器，它集电子技术、计算机技术、激光技术、流体理论、细胞荧光化学技术及单克隆抗体技术于一体，被誉为实验室的“CT”。 流式细胞术则是一种在功能水平上对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析和分选的检测技术，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的 ...

丁香园网友lidm的问题为： 我要分析骨髓间充质干细胞的表面抗原，以分析我提纯的细胞是否有许多造血干细胞和成纤维细胞。请赐教！ 丁香园网友schoman的回答为： 骨髓间质干细胞的检测并不难，只要有荧光标记得抗体，操作非常容易，但是，对于骨髓间质干细胞的特异性标记我并不熟悉，请查找专业的文献，然后，按生产公司定购产品即可。 丁香园网友doctormeng的问题为： 流式与westen在检测蛋白表达 ...

gzgygy Microtubule Disruption and Tumor Suppression by Mitogen-Activated Protein Kinase Phosphatase 4，是2007年11月15号发表在Cancer Research上的一篇研究论文。我们的研究生在阅读过程中看到了其中的疑问，过来求证。经过讨论，我们认为这篇文章包含了严重的实验失误，于是先和文章的通讯 ...

摘　要: 目的　探讨ENA 多肽抗体谱与L E 细胞(L EC) 检查在SL E、ITP 及肾炎之间检测结果的关系。方法　对同一病人应用免疫印迹法检测ENA 多肽抗体谱以及用改良血块法检查L E 细胞共136 例(SL E 78 例、ITP 22 例、肾炎36 例)。结果 在52 例L EC 阴性SL E 患者中 ENA 多肽抗体谱总阳性率为80.0% (42/52) ; 在26 例L ...

正常细胞的磷酯酰丝氨（phosphatidylserinePS）位于细胞膜内表面，细胞凋亡时翻转露于膜外侧，可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的释放。将效应细胞与靶细胞充分共育后，用PE结合的效应细胞特异性单克隆抗体（如CD8-PE）标记效应细胞（不能与PE-mABA结合的细胞即为靶细胞），再用FITC-anne ...

MTT和CCK-8（上海同仁）的原理基本是一致的，但也存在如下的区别：（1）：常规操作的MTT法受药物本身的颜色、培养基的颜色、血清的浓度 使结果的变异较大。如采用潘兴瑜的MTT改进法将有效的降低试验的飘变率，本人硕士期间就采用潘的MTT改进法，试验重复一两次就的到理想的结果！受益非浅！（2）：CCK-8是最近新出现的方法，它操作简便、结果变异率小。对悬浮细胞的测定有它独到的地方！CCK-8为黄色 ...

MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。1、培养好细胞点板。养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。如果知道了细胞的名字，就可以上www.atcc.org检索细胞的培养信息，这个网站 ...

LDH释放法测定CTL的特异杀伤率1.2.3.1　效应细胞的制备　激惹5天后，于无菌条件下取出受鼠引流的腹股沟淋巴结，100目钢网研磨，调整细胞浓度为2×107.ml-1。台盼蓝色要求存活率>95%。1.2.3.2　靶细胞的制备　P815细胞株系DBA/2小鼠的肥大细胞瘤细胞株。连续传代培养，调整细胞浓度为2×105.ml-1或3.33×105.ml-1( ...

原理：用 Na 2 51 CrO 4 标记靶细胞，若待检效应细胞能杀伤靶细胞，则 51 Cr( 铬 ) 从靶细胞内释出。以γ计数仪测定释出的 51 Cr 放射活性，靶细胞溶解破坏越多， 51 Cr 释放就越多，上清液的放射活性也就越高，应用公式可计算出待检效应细胞的杀伤活性。 步骤（以CTL杀伤肿瘤细胞为例）： (1)效应细胞: 将分离的外周血T细胞 培养7 d后按照DC:T = 1 ...

细胞介导的免疫反应（cell mediated immune CMI）在机体抗感染及抗肿瘤免疫、移植排斥反应和自身免疫病中发挥重要的作用。CMI的主要效应细胞之一为细胞毒T淋细胞（cytotoxic T lymphocyteCTL）。目前在医学基础与临床研究中重视CTL活性测定，将其作为了解机体细胞免疫功能和探索疾病机理的重要方法之一。 经文学事业上的资助者的CTL活性测 ...

绵羊红细胞（SRBC）诱导小鼠DTH（足跖增厚法）1 原理 SRBC可刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞，4天后，当再以SRBC攻击时，即可见攻击部位出现迟发型变态反应。 2 材料 游标卡尺（精密度0.02mm）、SRBC、微量注射器（50μL）。3 实验步骤3.1 致敏 小鼠用2％(v/v)SRB ...

5-brdu 的分子量为307.1，将100mg分为三份30.7mg(0.1mmol），溶于1ml三蒸水，分装-20度保存。用的时候再稀释100倍，如在1ml溶液里加入10ul即可。尽量分装为小剂量，如100ul避免反复冻融使其活性降低。 BudR贮存液的配制：BudR 5mg（先用0.5ml 1N NaOH溶解）然后加蒸馏水至 5ml，即成1000ug/ml的贮存液，因BudR遇光会发生分解，贮 ...

1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。 2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。 3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。 4．甲醇/醋酸固定10min。 5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧 ...

原理：荧光染料CFSE 也可称为 CFDA SE(56- carboxyfluorescein diacetatesuccinimidyl ester) 即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂 是一种可穿透细胞膜的荧光染料具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团这使得CFSE 成为一种良好的细胞标记物。当CFSE以含有两个乙酸基团和一个succinimidyl ...

原理：T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体，在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA），抗CD２、抗CD３ McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖；而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体（SAC）、脂多糖（LPS，对小鼠有作用）则刺激B细胞发生增殖；美洲商陆（PWM）、肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖均有刺激作用。最近发现， ...

一）材料及试剂 1．培养基 ;RPMI-1640或TC199培养液 2．PHA;同形态学方法 3．小牛血清 4．3H-TdR;选用比活性为2Mci~10Mci/mg分子的制品，将1Mci/ml溶液以生理盐水稀释成100uci/ml，于4℃保存备用。临用时再用培养液稀释成10uci/ml溶液。 5．3%冰醋酸 6．浓 ...