抗体抗原实验

细胞爬片、甩片的制备（一）细胞爬片的制备（1）如果使用载玻片或盖玻片，必须在使用之前灭菌。可以一次灭菌并贮存在无菌状态下。如果使用少量的盖玻片，用金属镊子夹住盖玻片，在70%乙醇中浸泡，然后在火焰上烤干。要轻轻地镊取，以防破裂。为了方便起见，可以将盖玻片浸泡于70%的乙醇中，使用时放在火焰上处理。如果使用的盖玻片或载玻片数量较多，可以将它们放于专用的金属支架上，然后高压消毒。如果需要的数量更大， ...

LAK细胞和TIL活性的测定 LAK细胞和TIL活性的测定基本同NK活性测定方法。但所用靶细胞为对NK不敏感的肿瘤细胞，如Raji、Daudi或自体肿瘤细胞。常采用同位素法如51Cr释放试验、发光免疫测定法及MTT比色法等。 在此介绍MTT比色法。【试剂及材料】（1） 试剂：①四甲基偶氮盐（MTT）；②酸化异丙醇:含0.04mol/L HCl的异丙醇；③96孔细胞培养板。 ...

凝胶染色（一）标准考马斯亮蓝染色法（1）电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入５倍于凝胶体积的0.25%考马斯亮蓝R-250(溶解于50%甲醇和10%乙酸中)；（2）室温下振摇温育４ｈ至过夜；（3）去除染色液，收集保存可重复使用20-40次；（4）依次在25%甲醇和7.5%乙酸中室温振摇下脱色。灵敏度为0.1-0.5ug蛋白／每条带。注：使用加热的染色液或脱色液可以缩短染色或脱色时间。 ...

乳酸脱氢酶释放试验测定NK细胞活性【基本原理】 乳酸脱氢酶（LDH）是活细胞胞浆内含酶之一，在正常情况下，不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可释放至介质中.释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶I（NAD+）变成还原型辅酶I（NADH2），后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化氮唑蓝（INT）或硝基氯化四氮唑 ...

巨噬细胞吞噬功能测定―皮泡法【试剂及材料】（1） 斑蟊酊剂：取药用斑蟊以95％乙醇制成10％酊剂，室温下浸泡两周后使用。（2） 鸡红细胞（CRBC）悬液：取鸡血1～2ml，阿氏液抗凝（放4℃冰箱可保存2～4周）。试验前用无菌生理盐水洗3次，然后配成5％CRBC悬液。（3） Giemsa染色液【操作方法】（1） 取1cm2大小的滤纸 ...

单核-巨噬细胞趋化功能的检测【试剂及材料】（1） 趋化因子（见附注）（2） Hanks液（pH7.2） （3） 特制的上、下两层多孔趋化小室（4） Giemsa或瑞氏染液【操作方法】（1） 分离单核细胞，用Hanks液（pH7.2）调整为2～3×105细胞/ml；（2） 将趋化因子液25μl加入趋化小 ...

H33342释放法检测单核-巨噬细胞胞毒作用【基本原理】 H33342（Hoechst33342）为DNA的特异性荧光染料，可用其标记肿瘤细胞以检测单核细胞对肿瘤细胞的杀伤效应。被损伤的靶细胞DNA断裂后，H33342释放到上清液中，采用微量荧光仪可定量测定上清液中的荧光强度。效应细胞的杀伤活性与靶细胞释放的荧光强度呈正相关。该方法同样可用于CTL、NK、LAK或TIL等杀伤细胞的活性检测。 ...

嗜碱性粒细胞功能的测定―嗜碱性粒细胞脱颗粒试验 嗜碱性粒细胞不仅参与速发型超敏反应，而且参与机体抗肿瘤免疫应答。检测嗜碱性粒细胞的功能有助于过敏性疾病的诊断和肿瘤的预后判断。【试剂及材料】（1） 新鲜的抗凝血（用0.1mol/L pH7.7 EDTA抗凝血）（2） Hanks液（3） Alcian蓝染液 【操作方法】（1） ...

MTT法检测单核-巨噬细胞胞毒作用 单核-巨噬细胞在机体免疫反应中起着重要的作用，因此，检测单核-巨噬细胞功能对于了解机体的免疫功能状态具有重要意义。下面介绍几种常用的单核-巨噬细胞功能的检测方法。【试剂及材料】（1） LPS（2） 靶细胞（L929，K562或LL937）（3） MTT（5mg/ml）【操作方法】（1） ...

细胞因子及其受体的检测 细胞因子（cytokine，CK）是指由免疫细胞（如T细胞、B细胞、NK细胞、单核/巨噬细胞等）和某些非免疫细胞（如内皮细胞、表皮细胞、成纤维细胞、骨髓及胸腺基质细胞等）经刺激而合成、分泌的一类生物活性物质，多属分子量为6～60KD的多肽或糖蛋白。 细胞因子通常包括白细胞介素（interleukin，IL）、干扰素（interferon，IFN）、肿瘤坏死因 ...

红细胞的SPA-酵母菌混合花环试验【基本原理】 葡萄球菌A蛋白（SPA）能与红细胞膜上粘附的IC中IgGFc段相结合，而补体致敏的酵母菌能与红细胞膜上未粘附IC的C3b受体相结合，各自形成花环。【试剂及材料】（1） 金黄色葡萄球菌：一般选用金黄色葡萄球菌的国际标准株CowanⅠ（ATCC 12598或NCTC8530），用不含SPA的Wood 46株作为阴性对照。目前已有 ...

IL-1的体外诱生 IL-1主要由活化的单核/巨噬细胞产生，具有广泛的生物学活性。IL-1包括IL-1α和IL-1β，两者分子量相近，且均能与IL-1R结合，故具有相似的生物学活性，常用的IL-1生物活性检测法对两者均适用。常用的IL-1生物活性检测法包括：小鼠胸腺细胞增殖法、L929细胞增殖法、D10G4.1细胞增殖法等。这些方法均不能区分IL-1α与IL-1β，只能用免疫学检测法才能加 ...

红细胞C3b受体花环及免疫复合物花环试验 近年来的研究表明红细胞也是一类免疫细胞。红细胞免疫功能主要是藉助其膜表面分子（如CR1、CR3、CD58、CD59、DAF、SOD酶等）的免疫粘附作用，在体内起清除垃圾的"清道夫"作用。 【基本原理】 红细胞膜上C3b受体可与补体致敏的酵母菌粘附形成花环（RBC-C3bR花结）；红细胞膜上粘附的IC中C3b分子可 ...

L929细胞增殖MTT比色法检测IL-1的生物活性【基本原理】IL-1具有刺激多种来源的成纤维细胞增殖的作用，可用于IL-1生物活性检测。目前国内外大多数实验室常用L929细胞株（小鼠成纤维细胞瘤细胞）作为检测IL-1生物活性的靶细胞或反应细胞。MTT比色法的原理是利用四甲基偶氮唑盐在活细胞线粒体的琥珀酸脱氢酶作用下，由淡黄色被还原成蓝紫色或蓝黑色的MTT-甲肷，形成的量与活细胞代谢率及细胞增 ...

3H-TdR掺入法检测IL-2的生物活性【材料和试剂】（1） 反应细胞：CTLL-2，存活率应＞95%。（2） IL-2标准品：倍比稀释为不同浓度。（3） 待测样品：倍比稀释为不同浓度。（4） 10% Fcs-RPMI-1640完全培养液（5） 3H-TdR（6） 96孔培养板，刻度吸管，毛细吸管，刻 ...

IL-2的体外诱生 IL-2主要由活化的CD4+T细胞产生，主要是促进T淋巴细胞的增殖与分化。IL-2是机体免疫网络中最重要的细胞因子，因此IL-2的检测已成为评价机体免疫功能状态的重要指标之一。但由于IL-2是通过自分泌或旁分泌方式发挥其生物学效应的，在生理性免疫应答过程中，IL-2不出现于血液等体液中，故体液中IL-2含量极少，难以直接测定，通常是通过检测体外诱生的IL-2来反映体内I ...

小鼠胸腺细胞增殖3H-TdR掺入法检测IL-1的生物活性【基本原理】IL-1可协同有丝分裂原（如ConA或PHA）刺激的T细胞或胸腺细胞发生增殖反应，通过3H-TdR DNA掺入法，即可测定IL-1生物活性。此法是目前测定IL-1活性常用而简便的方法，其敏感度达10-50pg/ml。但本法缺乏特异性，因为IL-1亦可刺激T细胞或胸腺细胞产生一些细胞因子（如IL-2等），同样可协同有丝分裂原刺激细 ...

MTT比色法检测IL-2的生物活性【基本原理】IL-2的生物活性检测法是检测IL-2对靶细胞（或反应细胞）的促增殖作用的能力。IL-2反应细胞增殖程度可以增殖细胞中DNA合成或酶活性为指示系统，通过测定3H-TdRDNA掺入量或MTT比色法OD值，并通过与标准品对照，间接测定IL-2的生物活性单位。以下三类细胞可作为IL-2的检测细胞：①IL-2依赖细胞株，如CTLL，CTLL-2，尤以后者最常 ...

结晶紫法检测TNF的生物活性 TNF包括TNFα与TNFß两型，它们具有极其相似的生物学活性，在体内外可对一些肿瘤细胞或细胞系起杀伤作用，而对正常细胞则无细胞毒效应。根据这一特点，可利用TNF对敏感靶细胞的细胞毒效应，在体外检测TNF的活性水平，既可检测分泌型TNF（sTNF），也可检测膜结合型TNF（mTNF）。最常用的方法是体外检测TNF对小鼠成纤维瘤细胞（L929细胞）的细胞毒效应。 ...

FACS法检测样品mTNF【基本原理】利用荧光标记的抗TNF McAb的免疫荧光技术和激光激活原理，通过FACS（荧光激活流式细胞分离术），即可对膜表面结合有TNF的单核/巨噬细胞进行定性或定量分析与分离。【材料和试剂】（1） 制备好的单核/巨噬细胞悬液（2） 含2%人血清、0.1%叠氮钠的PBS及PBS（3） FITC（异硫氰酶荧光素）标记的抗T ...