MTT法检测单核-巨噬细胞胞毒作用
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MTT 法检测单核-巨噬细胞胞毒作用
单核-巨噬细胞在机体免疫反应中起着重要的作用，因此，检测单核-巨噬细胞功能对于了解机体的免疫功能状态具有重要意义。下面介绍几种常用的单核-巨噬细胞功能的检测方法。
【试剂及材料】
（1） LPS
（2） 靶细胞（L929，K562或LL937）
（3） MTT（5mg/ml）
【操作方法】
（1） 取手术切除的脾脏，分离单个核细胞，采用粘附法获得脾Mφ或采用Percoll离心沉淀法分离外周血Mφ，调整细胞浓度至5×105 /ml；
（2） 将脾或外周血Mφ加入96孔板，每孔0.2ml，分别加LPS （终浓度为10μg/ml）置37℃，5％CO2 培养箱中培养48h；
（3） 加入靶细胞（效靶比为10：1）作用48h；
（4） 于终止培养前，每孔加入MTT 10μl，混匀后再培养4～6h；
（5） 吸弃上清液，每孔加入溶剂（DMSO）100μl，稍振荡待甲肷产物充分溶解；在酶标仪上，测定OD560nm ；
【结果分析】
细胞毒性百分率按下列公式计算:
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细胞毒性百分率
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= (1 -
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ODE+T-ODE
|
) ×
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100%
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ODT
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ODE+T=效应细胞孔OD值+靶细胞孔OD值
ODE=相应浓度单独效应细胞的OD值
ODT=相应浓度单独靶细胞的OD值
