抗体抗原实验

树突状细胞（DC） 树突状细胞作为一种重要的抗原提呈细胞，参与免疫应答的启动和调节。它具有一些不同于其他细胞的特性如粘附性（过夜培养后，便失去粘附性）、比重较低等。人外周血中DC含量很少，仅占单个核细胞的0.1%～1%。利用细胞粘附和密度梯度离心的方法虽然可分离纯化外周血树突状细胞，但此法分离的DC，不仅纯度低，数量少，而且处于不同的分化阶段，已难以满足临床研究的需要。随着人们对DC发生学 ...

免疫荧光染色技术检测各类免疫细胞的数量 免疫细胞在各自正常分化成熟的不同阶段以及活化过程中，其细胞膜表面均表达可供鉴别的特殊结构，即表面标志。其中CD分子常作为各类免疫细胞的表面标志用于免疫细胞的鉴定和分离以及用于检测在不同状态下某类免疫细胞数量的变化，能够反映机体免疫功能状态，有助于研究某种疾病的发病机制，为疾病的诊断和治疗提供依据。【基本原理】 利用荧光素标记抗人T细胞亚群的单克 ...

微量细胞毒试验检测各类免疫细胞的数量【基本原理】 在补体存在的情况下，针对淋巴细胞CD分子的McAb与相应的CD分子结合，可将细胞杀死，其细胞膜失去屏障作用而使伊红染料透入细胞内，使之染呈红色。而无相应CD分子的细胞则不受损伤，因而不着色。计数死亡细胞数，即可判断待检细胞是否具有相应的CD分子，从而确定T细胞的亚群。该方法简便易行，准确性较高。【试剂及材料】（1） 新鲜兔补体（ ...

红细胞花环法检测各类免疫细胞的数量【基本原理】 采用戊二醛交联技术将McAb或兔抗鼠IgG与羊红细胞（SRBC）结合，制成致敏的SRBC。抗体致敏的SRBC可与T淋巴细胞直接或间接结合，在T淋巴细胞周围形成花环。通过计数花环形成率，从而确定T淋巴细胞各亚群。该方法可分为直接红细胞花环法和间接红细胞花环法。现以间接花环法为例。【试剂及材料】（1） 醛化二抗致敏的SRBC（2） ...

MTT比色法【基本原理】 MTT法是Mosmann 1983年报道的，以后此方法得到了迅速发展并广泛应用于临床与科研研究。其原理是活细胞内线粒体脱氢酶能将四氮唑化合物（MTT）由黄色还原为蓝黑色的甲肷，甲肷的生成量与细胞的增殖程度呈正相关。后者溶于有机溶剂（如二甲亚枫或酸化异丙醇等），并可在560nm波长下进行检测。【试剂及材料】（1） MTT：用PBS配成5mg/ml的 ...

3H-TdR掺入试验【基本原理】淋巴细胞受特异性抗原或有丝分裂原刺激后，在转化为淋巴母细胞的过程中，DNA的合成明显增加。且其转化程度与DNA的合成呈正相关，此时若将合成DNA的前体物质胸腺嘧啶核苷用放射性同位素（3H -TdR）标记，加入到培养体系中，即被转化的淋巴细胞摄取而掺入DNA分子内。培养终止后，测定淋巴细胞内掺入的3H -TdR的放射量，就能判断淋巴细胞的转化程度。此方法较客观、精确 ...

MHC/多肽四聚体法检测抗原特异性T细胞数量T细胞通过其表面TCR特异性识别抗原呈递细胞表面的MHC/抗原肽复合物后，被活化和发生增殖，进而分化成效应细胞。因此，可以用MHC/抗原肽复合物检测T细胞表面的特异性TCR，来反映抗原特异性T细胞数量的变化。 Altman等首次发明MHC/多肽四聚体方法并应用于检测可识别HIV抗原肽的特异性CTLs，获得成功。后经Walter等改进，成为检测和 ...

XTT比色法【基本原理】 XTT比色法有Scudiero等首次采用，用于检测细胞增殖。XTT是异种与MTT类似的四唑氮衍生物，可被活细胞线粒体脱氢酶还原成水溶性的棕色甲肷产物，当XTT与电子偶合剂共同使用时，甲肷的生成量与细胞的增殖程度呈正相关。【试剂及材料】（1） XTT：用60℃预热培养液配制成6.6mmol/L，过滤除菌，现配现用。（2） 吩嗪二甲酯 ...

特异性抗原诱导的细胞毒性T细胞功能测定【基本原理】 本方法先借助长期混合淋巴细胞培养法获得抗原特异性CTL，然后再进行细胞毒试验。其原理为：外周血淋巴细胞包含针对不同抗原的特异性CTL克隆，在体外经某一特定（或同种异体细胞）抗原刺激后，能识别该抗原的T细胞克隆被选择性激活、增殖，而其他T细胞克隆则逐渐死亡；经3~4次刺激后，存活的均为识别特异性MHC/抗原肽复合物的细胞，即抗原特异性CTL ...

单向混合淋巴细胞培养【试剂及材料】（1） 供者和受者淋巴细胞悬液：浓度调至1×106/ml。（2） 丝裂霉素C：用培养液或PBS配制300μg/ml。（3） 含20％NCS的RPMI-1640完全培养液（4） 3H-TdR【操作方法】（1）刺激细胞的制备:取淋巴细胞1×106，加入最终浓度为30μg/ml的丝裂霉素C，于37℃水浴 ...

抗CD3 McAb诱导的细胞毒性T细胞功能的检测【试剂及材料】 （1） 靶细胞：EB病毒转化的B淋巴母细胞。（2） 含5％NCS的RPMI-1640完全培养液（3） 100μCi/ml 51Cr（4） 抗CD3 McAb（4μg/ml）（5） 2％Triton X-100。【操作方法】（1） 靶细胞 ...

抗TCR介导的CTL活性酯酶分析法 细胞毒性T细胞对靶细胞杀伤的主要机制是通过释放的穿孔素-颗粒酶系统介导的溶靶细胞作用或通过fas/fasL系统介导的细胞凋亡作用。因此，对CTL颗粒酶的胞泌作用分析可反映细胞毒性T细胞功能。该方法操作简便且无需靶细胞作为指示细胞。【基本原理】应用直接针对TCR的单克隆抗体，模拟特异性靶细胞的作用，诱导CTL细胞内颗粒丝氨酸酯酶等的释放。抗TCR可与C ...

佛波酯（phorbol esters）和钙离子载体诱导的CTL颗粒酶释放分析法【基本原理】 用佛波酯（phorbol esters）和钙离子载体处理CTL，通过一种TCR复合物非依赖性机制，刺激CTL细胞颗粒酶的胞泌作用。【试剂及材料】（1） 1mg/ml十四酰佛波乙酸酯（phorbol myristate acetate，PMA）二甲亚砜溶液。（2） 1m ...

BA-Spot-ELISA法检测抗体形成细胞【试剂及配制】（1） 包被液（pH 9.6 碳酸盐缓冲液）Na2CO3 0.16gNaHCO3 0.29g蒸馏水加至 100ml（2） 洗涤液（pH 7.4 PBS-Tween 20） KH2PO4 0.2g Na2HPO4・12H20

反向空斑形成试验（RHPA）【基本原理】 反向空斑形成试验（reversed hemolytic plaque assay，RHPA）是一种体外检测人类Ig分泌细胞的方法。该法将待检人的PBMC或组织来源的淋巴细胞（如扁桃体、脾细胞等）、SPA致敏的羊红细胞（SPA-SRBC）、抗人Ig抗体及补体4种成分混合，注入由两张玻片制成的小室内，密封小室，37℃温育3～5h。此时抗人IgG抗体的F ...

配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液溶液成分不同体积(ml)凝胶液中各成分所需体积(ml)123456819浓缩胶水0.681.42.12.73.44.15.56.830%丙烯酰胺溶液0.170.330.50.670.831.01.31.71.0mol/L Tris-HCl，pH 6.80.130.250.380.50.630.751.01.2510%（w/ ...

常用储存液的配制溶液配制方法注释PBS将8.0g NaCl、0.2gKCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，将pH调整至7.4，补充蒸馏水至1L，分装，高压灭菌，室温保存可配成10x储存液TBS将8.0g NaCl、0.2g KCl、3gTris，溶解于800ml蒸馏水中，用1mol/LHCl将pH调整至8.0，补充蒸馏水至1L，分装，高压灭菌，室温 ...

常用发色底物一、产生水溶性产物的发色底物酶底 物简 称启始颜色终颜色吸收峰（nm）辣根过氧化物酶22’-乙基苯噻唑黄酸盐邻苯二胺33¢55¢-四甲基联苯胺ABTSOPDTMB无色无色无色绿色棕色黄色410492450碱性磷酸酶对硝基酚磷酸盐PNPP无色黄色405b-半乳糖苷酶邻硝基苯酚-b-d-吡喃半乳糖苷ONPG无色黄色410二、产生非水溶性产物的发色底物酶底 物简 称启始颜色终 ...

实验用小鼠的品系实验用小鼠的品系品 系缩 写毛 色MHC-II类基因单体型注 释A/JA白色kAKRAK白色kBALB/CC白色d多数患骨髓瘤的亲代为异基因CBACB野鼠色kC3HC3野鼠色kC57BL/6B6黑色b常用做转基因F2的亲代C57BL/10B10黑色b多数H2是同基因DBA/2淡褐色d常用做转基因F2的亲代NZB黑色d适合制作抗自身抗体SJL白色s常用做转基因F2的 ...

配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液溶液成分不同体积(ml)凝胶液中各成分所需体积(ml)5101520253040506%水2.65.37.910.613.215.921.226.530%丙烯酰胺溶液1.02.03.04.05.06.08.010.01.5mol/L Tris-HCl，pH 8.81.32.53.85.06.37.510.012.510%（ ...