抗体抗原实验

一、E.coli/phage 裂解液预吸附血清 1. 将E.coli /phage lysate 以1:10-20 稀释在TBST 溶液中。 2. 将4 张82mm 的nitrocellulose membranes（NC）浸入稀释后的E.coli/ phagelysate 中，室温下水平摇动30 分钟，取出NC 并使膜沥干。 3. 用50ml TBST ...

目的:通过特异性阻断PI3K和mTOR观察HepG2和Hep3B细胞株PI3K/Akt/mTOR信号通路活性及生物学行为的改变探讨相关的分子机制。 方法:在培养的HepG2、Hep3B人肝癌细胞株和人正常肝细胞株QSG-7701上以免疫印迹方法(Western blot)检测各细胞株中PI3K(p110α亚单位)、PTEN、pAkt(S473T308)和p-mTOR(S ...

Abstract Chaperones (stress proteins) are essential proteins to help the formation and maintenance of the proper conformation of other proteins and to promote cell survival after a large varie ...

1957年Ceppelini等首次报道了系统性红斑狼疮（SLE）患者的血清成分可与DNA发生反应，随后建立了几种定性和定量检测抗DNA抗体的方法。随着研究的不断深入，发现定量检测IgG型抗DNA抗体对SLE更具诊疗参考价值。在SLE患者的血清中存在三种类型的抗DNA抗体，其中的抗dsDNA和抗ssDNA最常见也最常用。本文以问与答的形式围绕两种抗体的应用向读者逐一介绍。问：抗ssDNA抗体存在于多 ...

1. 抗原本身的有关性质：抗原刺激免疫动物产生抗体的能力，是否使用佐剂，注射途径及注射间隔时间等。2. 抗原必须纯化：对于免疫用的抗原，成分必须均一，除了作为免疫原的抗原物质外，不能含有可激发机体产生其它抗体的物质。在制备病毒抗血清时，必须去除寄主蛋白成分；假若这种材料是互不相同的病毒复合感染的，还必须将这些互不相同的病毒一一分离。只有制备了具有一定浓度的纯化的抗原，才能制备出高效价的专业性抗血清 ...

1． 剪取一小条0.45 μm 的硝酸纤维膜，置于1.5ml eppendorf 管中，浸没于1 ml，1 mg/ml 的抗原溶液中，5 min。2． 取出膜，置于滤纸上干燥。3． 将膜放置于装有1 ml Buffer A 的eppendorf 管，轻轻震荡混匀30 min。4． 移去Buffer A，用新鲜的Buffer A 洗一次，将膜浸没于0.8-1 ml 相应的抗血清中，1-2 h ...

1. 取第二轮筛选得到的阳性克隆贮存液上清。 2. 将过夜培养的 XL1-blueMRF' 细菌 2000 转/ 分离心 10 分钟，将细菌溶解在10mMMgSO4 中，调整细菌溶度到 OD600=1.0。 3. 在一个 EP 管中加入：200ul XL1-blueMRF' 细菌+250ul phagestock（步骤 1）+1 ul ExAssisthelper phage。 ...

1. 将 E.coli /phagelysate 以 1:10-20 稀释在 TBST溶液中。 2. 将 4 张 82mm 的 nitrocellulosemembranes（NC）浸入稀释后的 E.coli/ phage lysate中，室温下水平摇动 30 分钟，取出 NC 并使膜沥干。 3. 用 50mlTBST 溶液洗膜 3 次，每次 10 分钟。 4. 用滤纸轻轻吸去膜上的液体。 5. ...

抗体稳定剂是许多研究应用中有用的工具。只要抗体能够保持天然构象，抗体就可以特异的结合到靶抗原上并且具有很强 的亲和力。将抗体保存在室温会破坏其结合活性，甚至4°C也不例外。常用的避免破坏活性的方法是冷冻抗体。但是，任何冻融的过程都会减少一部分抗体的活 性。多年来，另一种常用的保存方法是将抗体保存在含有牛血清白蛋白（BSA）的溶液中。但是，许多抗体在冷冻或添加BSA后依然不稳定。 目前，新 ...

一、实验目的： 单克隆抗体制备是细胞免疫学的一个重要里程碑，它涵盖了细胞培养、细胞融合、免疫动物和抗体效价检测等各个方面内容。了解单克隆抗体制备的原理、主要步骤和方法。 二、实验原理： 骨髓瘤细胞在体外培养能大量无限增殖，但不能分泌特异性抗体；而抗原免疫的B淋巴细胞能产生特异性抗体，但在体外不能无限增殖。将免疫脾细胞与骨髓瘤细胞融合后形成的杂交瘤细胞，继承了两个亲代细胞的特性，既具有骨髓瘤细胞能 ...

不同类型抗体的保存指南，用以避免抗体污染或损伤 请不时核查数据表以获取特定保存建议。对于未正确保存的抗体，Abcam 不予保证。如果恰当保存和处理，大多数抗体应能保持活性数月乃至数年。

在细胞中，成熟的miRNA分子可与Argonaute(Ago)蛋白家族形成RNA沉默复合体(RISC)，降解靶mRNA或者抑制转录（图1）。在人类中普遍存在4种Ago蛋白（Ago1-Ago4），在Ago家族蛋白中表达最多的是Ago2，它具有Slicer活性，可切割其靶RNA，在microRNA调控路径中具有重要意义。针对这种Ago蛋白，利用抗体，经RISC免疫沉淀，即microRNA与靶mRNA共沉淀，由此可回收microRNA。

当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。抗体种类繁多，品牌众 多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。

如今，单克隆抗体市场炙手可热。一方面，由于巨大的应用价值，单克隆抗体需求强劲。另一方面，单克隆抗体制备工艺复杂、周期长。为此，能否快速制备出高质量的单克隆抗体已成为影响抗体研究应用的关键。46天制备出高质量的单克隆抗体在几年前在京天成生物技术（北京）有限公司得以实现，从而使之在全球制备高质量单克隆抗体服务竞争中占极大优势。 单克隆抗体具有理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、便于 ...

美国科学家在8月8日出版的《美国国家科学院院刊》上撰文指出，他们最新发现了一种能识别30多种流感病毒菌株的人类广谱抗体，更多地了解这种抗体有助于科学家研制出长期有效的流感疫苗。 波士顿儿童医院的斯蒂芬·哈里森和同事在一名男性志愿者体内发现了这种名为CH65的中和抗体，其能黏附在流感病毒表面的血细胞凝集素蛋白质上，从而中和流感病毒的毒性，阻止病毒入侵人体细胞。 血细胞凝集素是流感病毒 ...

法国科学家在美国最新一期《科学转化医学》杂志上报告说，他们开发出一种能预防丙型肝炎的疫苗，动物实验显示这种疫苗有效。 目前世界上通用的丙肝疫苗都属于治疗性疫苗，还没有疫苗能起到预防丙肝的作用。与甲肝和乙肝不同，大多数人无法依靠自身的免疫系统清除丙肝病毒，这是因为丙肝病毒在受到人体免疫系统攻击后，会转为更强大的变种。 法国巴黎第六大学的科学家利用类病毒颗粒开发出一种丙肝疫苗。类病毒颗粒和病毒相似， ...

市场上的胎牛血清种类繁多，鱼龙混杂，很多科研工作者，特别是刚接触细胞培养的人，难以分辨血清质量的优劣。本人根据十多年来血清生产销售的经验，总结如下： 一、外观 拿到血清，最先接触的是血清外观，对于缺少细胞培养经验的人来说，外观的判断尤为重要 1、颜色 根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响， ...

孵育一抗 A. 先将需要检测的抗体准备好，并决定好它们的稀释度。 B. 配好5%的Milk(TBST溶解)，按要求稀释好抗体。注意，如需高比例稀释， 最好采用梯度稀释。 C. 将稀释好的抗体和膜一起孵育。 一般采用RT 1小时，可根据抗体量和膜上 抗原量适当延长或缩短时间。 注意：为了便于后面分析结果，我们一般会选用已确定分子量大小而且纯度高的抗体作为marker与一抗同时孵育。 洗涤 用 TB ...

来源自：http://protein.dxy.cn/bbs/topic/17898080 --WB真正的难点：抗体的使用是一种艺术，一种抗体一个脾气。 对WB结果有决定性影响的因素是抗体的效价和如果正确使用手中的抗体。无论你如何提高自己的转膜技术，高效和低效之间往往只有数倍的差异，而抗体的效价可以差数千倍以上；同样，正确使用抗体可以保证抗体效价不被过分的拮抗，谋求特异性和非特异性背景之间差异的最 ...

二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑： 【一抗的种属来源】 二抗应选用与使用的一抗相同的物种 ...