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饱和氯化钠法提取外周血DNA

实验原理 以蛋白酶K 和SDS 裂解细胞释放DNA,而DNA 在浓度较高的氯化钠溶液中的溶解度很高,Na 与带负电的DNA 结合成DNA 钠盐,这时DNA 在溶液中呈溶解状态。以氯仿抽提DNA,去除溶液中蛋白杂质后以3M NaAc 沉淀DNA。 实验试剂 1. TE buffer(pH 8.0)2. 蛋白酶K3. SDS4. 饱和氯化钠5. 氯仿6. 3M NaAc(pH 5.2)7. ...

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Fastfilter Plasmid Midi Kit Spin Protocol

实验步骤 Growth of bacterial culture:1. Culture volume: Inoculate 30-50 ml LB/ampicillin (50 ug/ml) medium placed in a 200-400 milliliter culture flask with E.coli carrying desired plasmid and grow at 37 ...

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细胞爬片的免疫组化染色鉴定

实验试剂 PBS,0.5%Triton X-100(DPBS配),3%H2O2,封闭血清 (5%正常二抗血清DPBS液),一抗(PBS配,滴度1:200,湿盒),二抗工作液(湿盒),C液(湿盒),DAB显色液,苏木素,树胶 实验设备 20mm盖玻片,90mm培养皿,电子显微镜 实验步骤 1. 将已消毒的20mm盖玻片置于90mm培养皿中,按2×104/ml的细胞密度将细胞 ...

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High Resolution Agarose Gel Electrophoresis

实验步骤 Dissolving Agarose 1000 (NOTE: Chill Agarose 1000 gels for 30 minutes at 4°C before use to achieve best resolution.Method 1: Microwave (recommended for Into a flask holding 2-4 times the desire ...

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PCR Reagent System

实验步骤 1.Routine ProtocolThe following protocol is optimized for the control DNA and the primers provided with this kit. This protocol may serve as a starting point for any PCR amplification. Critical ...

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聚乙二醇沉淀法检测循环免疫复合物

实验原理 一定浓度的MW6 000~8 000的聚乙二醇(PEG),能沉淀免疫复合物,但不能沉淀正常球蛋白,沉淀的免疫复合物可用放射免疫法或用分光光度计测定其含量。 实验试剂 1. 0.1mol/L硼酸盐缓冲液称取硼砂0.64g,硼酸0.51g溶解于100ml蒸馏水中,pH值8.4。2. 6%PEG取6gPEG(MW6 000),溶于100ml硼酸盐缓冲液中。3. 氯化铯溶液称取CsC ...

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Differentiating Neural Stem Cells into Neurons and Glial Cells

实验试剂 KnockOut™ D-MEM/F-12Dulbecco’s Modified Eagle Medium (D-MEM)Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline (D-PBS)StemPro® NSC SFMN-2 SupplementB-27® Serum-Free SupplementNeurobasal® MediumAntibiotic-Anti ...

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免疫组化SABC法与SV法

实验原理 SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法。亲和素(Avidin)存在于鸡蛋中,分子量67000。是一种碱性蛋白质,具有对生物素近乎于共价键的结合力。链霉亲和素是一种从链霉菌(Streptomyces Avidinii)培养物中所提取的蛋白质,分子量47000,不含糖链,等电点IP=6.0-6.5。 ...

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组织免疫沉淀中染色质的制备

实验步骤 1. 交联1) 用刀片将冰冻或新鲜组织切成小块 (1-3 mm3)。2) 取一个空的 15 ml 锥形离心管,称重,放入组织后再次称重,计算组织重量。3) 在通风橱中配制交联所用溶液。每克组织加 10 ml PBS。加入终溶度 1.5% (v/v) 的甲醛,室温旋转 15 分钟。4) 加入甘氨酸至终浓度 0.125M,以终止交联反应。继续室温旋转 5 分钟。5) ...

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叶绿体的制备及其对染料的还原

实验原理 细胞或组织和分离介质混匀,经破碎匀浆后用差速离心法,经几次不同转速可以获得不同的细胞器。离体的完整具有光合活性的叶绿体的制备就是采用这种方法。被分离的离替叶绿体是否具有光合活性,可以用不同的方法来鉴定,对染料(2-6—二氯酚酊粪)在光下还原作用是其中的一个方法。 光e- ...

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Indirect flow cytometry (FACS) protocol

实验步骤 1. Harvest and wash the cells then determine the total cell number.Cells are usually stained in polystyrene round bottom 12 x 75 mm 2 Falcon tubes. However they can be stained in any container f ...

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烟粉虱寄生蜂寄主竞争实验

实验设备 温室养虫笼(40 cm × 50 cm × 60 cm)体视解剖镜(Motic 140) 昆虫针塑料培养皿(直径815 cm)数码相机医用注射器 实验材料 1. 供试植物:盆栽西红柿 2. 供试昆虫:B型烟粉虱,丽蚜小蜂,浅黄恩蚜小蜂 实验步骤 1. 供试昆虫的培养 (1) 烟粉虱经室内分子检测确认为B 型,室内用西红柿饲养,将西红柿苗(25 cm 高) 接 ...

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Isolation of Total RNA from Animal Cells use RNeasy Mini Kit

实验试剂 SDS based extraction solution 实验步骤 1. Harvest cells.1) Trypsinize and collect cells aspirate medium and wash cells with PBS twice. 2) Determine the number of cells.3) Transfer c ...

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基因表达快速分析新技术

实验原理 MPSS技术是利用限制性内切酶和荧光检测知识发展出的一种辨认和测定细胞每一个cDNA 克隆片段末端16~20bp序列的方法从而查明细胞内所有基因的表达情况。MPSS 分析系统大体可划分为三大部分如图1 所示:微球体阵列槽、反应液供排系统和荧光信号处理系统。其中微球体阵列槽主要功能是微球体从槽的一端进入在槽内紧密排列形成微球体阵列;反应液供排系统主要功能是在连接、酶切、洗脱等过程中自动供 ...

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细胞共定位

实验试剂 高保真聚合酶(pfu ultra),限制性内切酶(XhoI、SpeI、BamHI、SpeI、SacI),金粉,无水乙醇,2.5MCaCl2,20ul 0.1M亚精胺 实验设备 PCR扩增仪,PDS-1000/He型基因枪,激光共聚焦显微镜(Carl Zeiss LSM 510 ) 实验材料 洋葱 实验步骤 1. 载体的构建pA7- CFP- AtCOP1, ...

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AbC Anti-Rat/Hamster Bead Kit

实验试剂 The AbC™ RH capture beads and negative beads have a diameter of approximately 6 μm (actual size for each lot is listed on the component vial). The bead suspensions are supplied in dropper vi ...

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转基因小鼠制备实验方法

实验步骤 1. 选取7~8周龄雌性小鼠,阴道口封闭,作为供体,下午3:00左右,每只小鼠腹腔注射PMSG(10 IU)。 2. 47~48小时后,每只小鼠腹腔注射HCG(0.8 IU),并与正常公鼠合笼;另取数只适龄母鼠(2月龄以上)作为受体,阴道口潮红,与结扎公鼠合笼。 3. 第二天上午9:00前观察供体、受体,有精栓者拿出备用。受体笼拿出作好隔离措施。 4. 10:30左右,断颈处死供 ...

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Transformation of HB-101 Competent Cells

实验步骤 1.Thaw tubes of competent cells on ice occasionally inverting gently to mix.2.Pre-cool Falcon 2059 tubes on ice.3.Aliquot 30 ul cells into each tube.4.Add up to 10 ul DNA in TE or ligation b ...

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SILANE Genomic DNA

实验原理 The Dynabeads SILANE genomic DNA kit provides an excellent tool for isolation of genomic DNA from human blood following a simple separation protocol. A buffer is first added to the sample for ly ...

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人体外周血淋巴细胞培养及染色体制片

实验原理 人体的1ml 外周血中一般含有约1-3×106个小淋巴细胞,通常它们都处于间期的GO和G1期。在培养条件下给予药物刺激时,经过53-72小时可在培养物中获得大量的有丝分裂细胞,供染色体标本制备和分析之用。这种外周血培养方法是在1960年由Moorhead等所建立的。人体外周血的形成包括红细胞、白细胞、血小板,其中红细胞和血小板不能离体培养。血细胞中的小淋巴细胞处于间期的GO和G1期。 ...

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