微生物学技术

一、目的 流感病毒的MDCK细胞分离方法是流感实验的关键技术，用于流感病毒的分离、培养。本SOP是为确保MDCK细胞分离流感病毒的操作准确、规范和可靠而制定。 二、范围 适用于实验室所有技术人员进行流感病毒的MDCK细胞分离。 三、程序 （一）生物安全要求 H5H7亚型高致病性禽流感病毒，H2N2亚型流感病毒的MDCK细胞分离实验室生物安全级别：BSL-3。实验操作人员需进行BSL-3防护，具体详 ...

200 ml 1000 ml 4000 ml Mycoplasma broth base (Gibco) 4.5 ...

Base: Bacto Heart Infusion Broth 1.2% Bacto Yeast Extract 0.5% Bacto P ...

1.Yeast (93.75 g) + Super Q Water (562.5 ml) per flask. 2.Place in incubator at 37°C for 20 minutes. 3.Heat to 90-100°C for 5 minutes. 4.Cool on ice. 5.Pour into centrifuge bottles and centr ...

1. Spin 1.5ml fresh cells for 3 minutes. 2.Wash the pellet once with TNE buffer. 3. Suspend the pellet well in 20 ul TNE buffer. 4. Add 2 ul proteinase K ( stock 10 ug/ul in water -20 C). 5. Add 20 ul ...

Acid Adjusted Swine Serum 1. The before or morning of: adjust the pH of the swine serum to between 4.3 and 4.5 with 1N HCl. 2. Place serum for at least 1 hour at 4°C (overnight is best). 3. Centri ...

1. Spin 50 ml freshly grown cells. 2.Wash wash pellet twice with PBS. 3. Resuspend the pellet in 1ml TNE buffer ( same buffer as above. use 2 tubes 500 ul each). 4. Add 5 ul proteinase K and incubate ...

病毒含量较高的样品浸出液或体液，可不经过病毒分离直接用于诊断鉴定。病毒含量较少的样品，则需通过病毒的分离增殖来提高诊断的准确性和鉴定的可靠性。病毒分离首先要对样品进行适当的处理，然后接种实验动物或培养的组织细胞。 (一)组织器官样品的处理 1、用无菌操作取一小块样品，充分剪碎，置乳钵中加玻璃砂研磨或用组织捣碎机制成匀浆，随后加1-2ml Hank's平衡盐溶液制成组织悬液，再加1-2ml继续研磨， ...

一般情况下分离病毒可以用传代细胞、原代细胞或者直接用动物接种或者鸡胚接种，只有在找不到适合病毒生长的原代细胞或者传代细胞的情况下才运用动物接种或者鸡胚接种的方法分离病毒。 大致过程应该是这样的： 第一，获取病毒分离样品，这个要求比较高，采集后如果不能立即操作则必须低温保存，并尽快送实验室操作。另外也可以冷冻保存，一般情况下病毒是不容易冻死的。当然某些特殊病毒除外，这需要查阅相关资料。 第二：病毒分 ...

本文介绍几种常见的微生物基础试验的目的、原理、试验方法等，以便刚刚接触微生物的同志们对试验有个基本的认识。

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome VirusPRRSV) PRRSV was propagated in MARC-145 cells and purified by sucrose density gradient separation.Polyethylene glycol 8000(Sigma Chemical ...

微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。

第一天： 17：00：后用接种环取一单克隆细菌接种于LB培养液中，37°C摇床过夜（不要超过16小时） 第二天： 7：30：打开紫外灯，照射半小时（将器械放入通风橱中） 8：00：将20mL的LB培养液放入250mL的三角烧瓶中，按1：100的比例稀释过夜培养的细菌（即放入200ul 的细菌液体），将其放入37°C摇床，培养约3.5个小时 11：00：打开紫外灯，照射半小时 11： ...

计算支原体的菌数不能用血球计数板、比浊法等，需要采用菌落形成单位（CFU）计数法或者颜色改变单位（CCU）测定法。这两种计数法都需要几天才能出结果，也就是原来待测菌液的菌数。请问如何将该菌液保存下来，以便接下来的定量共同培养、抗药等实验？ 如果是直接将菌液放到－20度或者－70度冰箱保存，直到需要的时候再溶解，那么冻存过程中肯定有一定数量的支原体死亡，解冻后的菌液菌数也许远低于测定值CCU/CFU ...

zyh43把支原体菌种接种在培养基中，然后冻存（-20度），在跟踪培养时发现相同的菌种，有的可以保存一年，而有的一个月就死亡，有时加入甘油，只是效果也不大！对此不知各位有什么看法呢？ 1、假如不是同一培养液中的支原体，因为个体差异，保存的时间不一样是很正常的。 2、添加甘油作为保护剂，在-20°C～-30°C的普通冰箱冷冻保存时，因为添加保护剂的细胞混合物的共融点可能处在这个温度 ...

支原体（霉形体）的培养技巧支原体是介于病毒与细菌之间的一类微生物，在自然界广泛存在，使人和多种动物、植物害病。 它缺乏细胞壁而不同于细菌，能在无细胞培养基生长繁殖，并含有RNA和DNA而有别于病毒。支原体以二分裂方式繁殖，基本形态为圆形、丝状形，后者易形成分枝状菌丝，因而得名支原体。其大小介于病毒和细菌之间，最小直径125-250nm，可通过滤器。基因组小只5×108道尔顿，是已知能自 ...

最近看大家常提到支原体污染，就翻了翻书，做了些笔记，现在贴出来和大家分享： 支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0.2um)并独立生活的微生物。约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性。可为圆形、丝状或梨形。 支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构。其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞 ...

简易纯化方法： 1. Infect cells and incubate at 37°C until cytopathic effect is generalized.2. Scrape the cells off into the culture medium and spin at 3000g for 15 min to spin out the cells. 3. Ta ...

部分菌株对应的噬菌体分离过程步骤：1、噬菌体分离　(1) 以新鲜鸽粪4g 加入100ml 普通液体培养基内放入37 ℃温箱培养24h。(2) 次日从中取出10ml70 ℃加热30min 离心2000r/ 10min 上清液用滤器过滤后保存于4 ℃冰箱备用。(3) 在普通琼脂平板底面分别注明1、2、3 号。(4)在1 号平板接种事先培养好的6h 幼龄菌乙型副伤寒杆菌一接种环;2 号平板接种幼龄菌福氏 ...

　　近来在zyh43所在的医院检验科做支原体检测中，遇到一些问题：用支原体（UU/MH）培养、药敏、定量检测试剂盒测得阳性的病人，用这种试剂盒测定的药敏中敏感的抗生素进行临床治疗，但是经过几个疗程的治疗，没有任何效果，支原体感染仍为阳性，因此对他的药敏检测结果产生怀疑，想用一种方法检测这种试剂盒的药敏是否可靠，但是苦于不知用什么方法进行检测最为科学，因此在这里向各位同仁请教一二，望各位大侠不吝指教 ...