免疫学技术

一、ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应 ...

抗体 1.2.1 抗体的结构 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白 (immunoglobulinIg)。Ig 分五类，即IgG、IgA 、IgM、IgD 和IgE.与免疫测定有关的Ig 主要为 IgG 和IgM.Ig 由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。Ig 的轻链是相同的，有κ（kappa）和λ（Lambda ）两种型别。五类Ig 的重链结构不同，这决定了 ...

(1)RIA的优点 RIA具有许多其他分析方法无可比拟的优点。它既具有免疫反应的高特异性，又具有放射性测量的高灵敏度，因此能精确测定各种具有免疫活性的极微量的物质。①灵敏度高，一般化学分析法的检出极限为10-3～10-6g，而RIA通常为10-9-10-18g。②特异性强，由于抗原-抗体免疫反应专一性强，所被测物一定是相应的抗原。良好的特异性抗体能识别化学结构上非常相似的物 ...

一、放射免疫分析的基本试剂 （一）标准品 标准品是放射免疫分析法定量的依据，由于以标准品的量用来表示被涮物质的量，故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外，还应具备稳定性，即在合理的贮存条件下保持原来的特性。 按实验要求，将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液，用于制作标准曲线。 （二）标记物 标记抗原应具备：①比放射 ...

正常细胞的磷酯酰丝氨（phosphatidylserinePS）位于细胞膜内表面，细胞凋亡时翻转露于膜外侧，可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的释放。将效应细胞与靶细胞充分共育后，用PE结合的效应细胞特异性单克隆抗体（如CD8-PE）标记效应细胞（不能与PE-mABA结合的细胞即为靶细胞），再用FITC-anne ...

MTT和CCK-8（上海同仁）的原理基本是一致的，但也存在如下的区别：（1）：常规操作的MTT法受药物本身的颜色、培养基的颜色、血清的浓度 使结果的变异较大。如采用潘兴瑜的MTT改进法将有效的降低试验的飘变率，本人硕士期间就采用潘的MTT改进法，试验重复一两次就的到理想的结果！受益非浅！（2）：CCK-8是最近新出现的方法，它操作简便、结果变异率小。对悬浮细胞的测定有它独到的地方！CCK-8为黄色 ...

MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。1、培养好细胞点板。养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。如果知道了细胞的名字，就可以上www.atcc.org检索细胞的培养信息，这个网站 ...

LDH释放法测定CTL的特异杀伤率1.2.3.1　效应细胞的制备　激惹5天后，于无菌条件下取出受鼠引流的腹股沟淋巴结，100目钢网研磨，调整细胞浓度为2×107.ml-1。台盼蓝色要求存活率>95%。1.2.3.2　靶细胞的制备　P815细胞株系DBA/2小鼠的肥大细胞瘤细胞株。连续传代培养，调整细胞浓度为2×105.ml-1或3.33×105.ml-1( ...

原理：用 Na 2 51 CrO 4 标记靶细胞，若待检效应细胞能杀伤靶细胞，则 51 Cr( 铬 ) 从靶细胞内释出。以γ计数仪测定释出的 51 Cr 放射活性，靶细胞溶解破坏越多， 51 Cr 释放就越多，上清液的放射活性也就越高，应用公式可计算出待检效应细胞的杀伤活性。 步骤（以CTL杀伤肿瘤细胞为例）： (1)效应细胞: 将分离的外周血T细胞 培养7 d后按照DC:T = 1 ...

细胞介导的免疫反应（cell mediated immune CMI）在机体抗感染及抗肿瘤免疫、移植排斥反应和自身免疫病中发挥重要的作用。CMI的主要效应细胞之一为细胞毒T淋细胞（cytotoxic T lymphocyteCTL）。目前在医学基础与临床研究中重视CTL活性测定，将其作为了解机体细胞免疫功能和探索疾病机理的重要方法之一。 经文学事业上的资助者的CTL活性测 ...

绵羊红细胞（SRBC）诱导小鼠DTH（足跖增厚法）1 原理 SRBC可刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞，4天后，当再以SRBC攻击时，即可见攻击部位出现迟发型变态反应。 2 材料 游标卡尺（精密度0.02mm）、SRBC、微量注射器（50μL）。3 实验步骤3.1 致敏 小鼠用2％(v/v)SRB ...

5-brdu 的分子量为307.1，将100mg分为三份30.7mg(0.1mmol），溶于1ml三蒸水，分装-20度保存。用的时候再稀释100倍，如在1ml溶液里加入10ul即可。尽量分装为小剂量，如100ul避免反复冻融使其活性降低。 BudR贮存液的配制：BudR 5mg（先用0.5ml 1N NaOH溶解）然后加蒸馏水至 5ml，即成1000ug/ml的贮存液，因BudR遇光会发生分解，贮 ...

1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。 2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。 3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。 4．甲醇/醋酸固定10min。 5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧 ...

原理：荧光染料CFSE 也可称为 CFDA SE(56- carboxyfluorescein diacetatesuccinimidyl ester) 即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂 是一种可穿透细胞膜的荧光染料具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团这使得CFSE 成为一种良好的细胞标记物。当CFSE以含有两个乙酸基团和一个succinimidyl ...

原理：T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体，在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA），抗CD２、抗CD３ McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖；而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体（SAC）、脂多糖（LPS，对小鼠有作用）则刺激B细胞发生增殖；美洲商陆（PWM）、肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖均有刺激作用。最近发现， ...

一）材料及试剂 1．培养基 ;RPMI-1640或TC199培养液 2．PHA;同形态学方法 3．小牛血清 4．3H-TdR;选用比活性为2Mci~10Mci/mg分子的制品，将1Mci/ml溶液以生理盐水稀释成100uci/ml，于4℃保存备用。临用时再用培养液稀释成10uci/ml溶液。 5．3%冰醋酸 6．浓 ...

3H MTT检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的甲(Formazan)生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使C E成为 ...

混合淋巴细胞培养(MLC)或称混合淋巴细胞反应(MLR)常用于器官移植前的组织配型，以测定受体和供体主要组织相容性抗原(HLA抗原)相容的程度。由于MLC中淋巴细胞接受同种异型抗原的刺激而发生活化、增殖，产生种类众多的细胞因子，促进NK、LAK和CTL等杀伤细胞的分化，因此又是免疫调节研究中常用的实验模型。　　(一)　实验原理　　两个无关个体功能正常的淋巴细胞在体外混合培养时，由于HLAⅡ类抗原 ...

MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(45)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-35-di- phenytetrazoliumromide MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（ ...

Q：流式图画十字mark时的依据是：该管的同型对照？还是细胞分群？ 结果查到2005年的nature上一篇文章是按群分析的，一篇1995年的science是按同型对照来的 nature的图发上来吧，请老师看看！FIGURE 1. Identification of subsets of CD4+ and CD8+ T cells in a non-human primate (rhesus mac ...