免疫学技术

受体的分类与功能受体是细胞表面或亚细胞组分的一类生物大分子，可以特异性识别，并与有生物活性的化学信号物质(配体)结合，从而激活或启动一系列生物化学反应，最后导致该信号物质特定的生物效应。受体主要有两方面的功能：一是识别特异的信号物质一配体，与之结合；二是把识别和接受的信号准确无误地放大并传递到细胞内，启动一系列细胞内信号级联反应，最后导致特定的细胞生物学效应。要使细胞间的信号转换为细胞内 ...

DNA甲基化在肿瘤诊断中应用 表观遗传学吸引入的地方就是在肿瘤的早期检测中的应用，因为研究表明表观遗传的变化伴随肿瘤的发生与发展，使用表观遗传学方法可以有助于肿瘤的早期发现。现在肿瘤表观遗传治疗的主要研究方向包括DNA甲基转移酶和组蛋白去乙酰化酶抑制剂的研制及靶向诱导DNA甲基化等。 癌症的早期发现对癌症患者的有效治疗是非常重要的。目前对癌症的诊断主要依据临床症状、图像信号检测和组织 ...

ERK信号转导通路 在MAPK家族中，ERK是最先被发现并被了解最多的成员。ERK包括了两种异构体ERKl和ERK2(分别为P44和P42)。两个磷酸化受体位点即酪氨酸和苏氨酸被谷氨酸残基分隔开来，故其磷酸化位点基序是TEY。目前认为，P38和JNK属于“应激诱导”的MAPK，而ERK被认为是与细胞增殖、转化和分化相关的MAPK。 ERK级联反应包括典型的3个层次MAPKs的序贯激活 ...

PI3K―Akt信号通路 PI3K是一个复杂的大家族，根据其结构可分为3类：I型、Ⅱ型、Ⅲ型。 I型PI3K又分为IA和IB两个亚型，他们分别从酪氨酸激酶连接受体和G蛋白连接受体传递信号，其作用是催化磷脂酰肌醇(P1)在D3位的磷酸化，把底物PIP2转化为PIP3。IA型P13K是由催化亚单位Pll0和调节亚单位P85所组成的二聚体蛋白，具有类脂激酶和蛋白激酶的双重活性。在正常细胞中，P ...

细胞凋亡信号途径 细胞凋亡本质上是一种程序性细胞死亡，是机体在生理或病理条件下，启动自身内部机制，经过多途径的信号传递，结束其自身生命的过程。细胞凋亡具有特征性的形态学及生物化学改变。凋亡早期主要表现为胞质空泡，染色质浓缩并沿核膜排列；凋亡细胞与细胞外基质或周围细胞分离。随着凋亡过程的进展，胞质空泡与胞膜融合，导致膜发泡，随后空泡与细胞分离，引起水分丢失，细胞皱缩，同时染色质进行性固缩，并 ...

JNK信号转导通路 研究发现，用紫外线照射细胞后，一种蛋白激酶能够磷酸化f―jun，其磷酸化位点位于c―jun氨基末端活性区Set63和Ser73，该蛋白激酶被称为c―jun氨基末端激酶(c―jun N―terminal kinase，JNK)。JNK原来被称为应激激活的蛋白激酶(SAPK)。与其他MAPK一样，当酪氨酸和苏氨酸残基发生磷酸化后，JNK／SAPK也可被激活。JNK可以受各种 ...

Ras信号通路 很多生长因子如EGF、PDGF、FGF等激活受体酪氨酸激酶后，通过中介分子可活化由原癌基因FaS编码的Ras蛋白，后者能进一步催化其底物蛋白的酪氨酸磷酸化反应，并引发蛋白磷酸化的级联反应，最终导致细胞的增殖效应。由于Ras蛋白为多种生长因子信号转导过程所共有，故把此信号转导途径称为Ras通路。 Ras蛋白是癌基因las的编码产物，人类有3种ras基因，即H―FaS、K ...

P38MAPK信号转导通路 分裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein kinases，MAPK)家族是非常保守的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，是信号转导过程中一组主要的信号分子，在发育和疾病发生过程中起重要作用。该家族有4个成员，即细胞外信号调节激酶(extracellular regulated proteinhnase l／2，ERK 1／2)，c―jun N ...

激光共聚焦法检测外源性TFPI-1与大鼠MsC膜上TF的结合情况外源性加入组织因子途径抑制物-1(tissue factor pathway inhibitor-1，TFPI-1)能够诱导大鼠肾小球系膜细胞发生凋亡。TFPI-1是组织因子(tissue factor，TF)的天然抑制物，TFPI-1的Kunitzl结构域能与TF-Ⅶa复合物结合。通过免疫荧光检测发现大鼠肾小球系膜细胞膜上有TF的 ...

免疫组织化学-体内原位检测信号分子表达变化 免疫组织化学染色是引入附有标记物的外源性抗体(或抗原)，使之锚定于组织或细胞标本中相应的抗原(或抗体)部位，标记物经呈色反应而显示代检抗原(或抗体)，因此，免疫组织化学可按标记物的种类以及定位方法分类。按标记物分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫金银法、放射免疫自显影法等；按定位方法则分为一步法(又称直接法)、二步法(包括间接法、夹心法、补体法)和多步 ...

免疫印迹法检测MAPK信号通路表达改变 肾小球硬化的主要发病机制之一是细胞外基质(ECM)的异常沉积。转化生长因子p1(TGF-B1)在ECM沉积中起作用，并与MAPK信号通路有密切关系。醛糖还原酶(AR)是多元醇代谢通路中的限速酶，研究证实AR基因为大鼠肾小球肾炎及肾脏硬化过程中系膜细胞(MsC)的TGF-6l反应性基因之一。以蛋白质印迹检测正常MsC、AR转基因MsC、应用醛糖还原酶抑 ...

亲和免疫组织化学ABC法检测Thy-1肾炎过程中肾小球内TFPI-1的表达TFPI-1是体内主要的生理性抗凝物质，除具有抗凝作用外，还有抗炎、抗血管生成、 抗增殖及诱导细胞凋亡等多种功能。研究证明，系膜细胞能分泌TFPI-1。为研究TFPI- 1是否对肾小球肾炎具有一定的疗效，首先应用亲和免疫组织化学ABC法观察了在大鼠Thy-1肾炎过程中TFPI-1的表达情况。 1．方法 (1 ...

细胞凋亡与肿瘤发生 肿瘤的发生是多种因素相互作用导致正常细胞恶变的结果。导致肿瘤发生的外源性因素包括化学、物理、致瘤性病毒和真菌素等，内源性因素则包括肌体的免疫状态、遗传因素、激素水平、DNA损伤、原癌基因的激活和抑癌基因的失活等。归根到底，导致肿瘤发生的核心因素是基因调控的失常，典型表现是肿瘤细胞增殖和死亡速度之比的失衡，其中非常重要的一点便是细胞凋亡的抑制。 从细胞生物学的角度 ...

免疫荧光单标记和双标记的方法 l免疫荧光单标记方法 免疫荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子，方法比较简单，只要按照染色步骤去做，通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择，固定液选择的合适与否，可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。 1)所需材料与试剂 (1)培养在盖玻片或玻璃培养皿中融合程度达到60％一70％的细胞。 (2)一抗、FITC或TRITC标记的二抗 ...

细胞凋亡的形态学研究 细胞凋亡概念形成于20世纪60年代，代表性论文发表于1972年，3位科学家(JohnKerr，AndrewWyllie，A1astairCurrie)对此功不可没。Kerr在研究肝供血和肝组织结构时首先提出“凝固性坏死”(shrinkagenecrosis)的概念。他发现结扎大鼠肝左叶与中叶的门静脉后所形成的肝叶萎缩与一般情况下的“坏死”不同。肝叶萎缩过程中肝细胞逐渐 ...

激光扫描共焦显微镜的应用 激光扫描共焦显微镜(confocal laser scanning microscopy，CLSM)在传统荧光显微镜成像的基础上加装了激光扫描装置，利用紫外或可见激光激发荧光探针，对生物样品进行断层扫描，结合计算机对荧光图像进行加工处理，观察细胞和组织内部各个层面或不同侧面的形态变化。激光扫描共焦显微镜集激光技术、电子技术、光学设计及计算机于一体，它的优势为具有更 ...

细胞凋亡的原理和概念 细胞凋亡的过程可以划分为诱导期、效应期和执行期。诱导期是指细胞接受各种凋亡信号的过程；效应期是指凋亡信号引起细胞内信号转导通路改变并激活关键性信号分子的过程；执行期则是被激活的水解酶切割细胞内底物并引起细胞形态学改变，细胞最后裂解的过程。细胞凋亡是极其复杂的生物学过程，特别是哺乳动物细胞的凋亡是由特定信号引起的，其过程涉及上百种基因的协作。参与细胞凋亡的基因往往具有多 ...

细胞凋亡的生物化学研究 1980年，Wyllie率先报道了凋亡细胞DNA的有序降解。凋亡早期，内源性核酸内切酶(endonuclease)活化后剪切染色质DNA。DNA的有序降解表现为形成180―200bP整数倍的寡聚核甘酸片段，在琼脂糖电泳中产生经典的“梯形条带”。染色质DNA的断裂多为单链断裂，断裂的位置大部分位于核小体之间的连接部位，因此容易造成核小体之间散布一系列的单链切口，这也是 ...

caspase家族 自从确定ced-3在线虫细胞凋亡中的作用以后，人们投入了大量精力分离哺乳动物同源基因。1993年，Miura等首先发现哺乳动物的白细胞介素-1p转化酶(interleuhn-1Β convertingenzyme，ICE)与ced-3同源，并证实了ICE在哺乳动物细胞凋亡中的作用。在以后的几年中，有十几种ced-3同源基因被发现。由于某些ced-3同源基因由多个实验室同 ...

Bcl-2家族与内在凋亡诱导通路 1984年，Tsujimoto等从人类B细胞淋巴瘤细胞异位染色体t(14，18)上克隆了Bcl-2基因。染色体重排使位于18号染色体的Bcl-2基因转移到14号染色体的免疫球蛋白重链基因IgH的下游，其基因表达受IgH调控区控制。作为第一个调控细胞凋亡的癌基因，对Bcl-2功能的研究进一步证实了细胞凋亡在肿瘤发生中的作用。到目前为止，已发现20余种Bcl- ...